Mokslinė elektroninė monografijų biblioteka, išleista Rusijos gamtos mokslų akademijos leidyklos

Veikimo principas yra toks, kad kai bandymo juostelė yra panardinta į biologinis skystis(ar kitą skystą mėginį), jis pradeda migruoti juostele pagal plonasluoksnės chromatografijos principą. Kartu su juo perkelkite tuos, kuriems taikoma apatinė dalis bandymo juostelės yra paženklintos specifiniais antikūnais, kurie afinitetu jungiasi prie analitės.

Yra 2 ICA formatai: tiesioginis ir konkurencinis metodas.

Schemoje tiesioginis(sumuštinis) IHA ant konjugato membranos naudojamas konjugatas su antikūnais. Šiai analitei specifiniai antikūnai yra imobilizuojami ant tyrimo linijos, o anti-rūšiniai antikūnai, būdingi pirminiams antikūnams, imobilizuojami ant kontrolinės linijos. Kai naudojamas mėginys, kuriame yra analitės, kai mėginys su konjugatu patenka į membraną, analitė prisijungia prie At-tag konjugato. Tada imuninis kompleksas patenka į tyrimo zoną, kur prisijungia prie specifinių antikūnų, sudarydamas Ab-Ag-Ab etiketės „sumuštinį“. Nesurišto konjugato perteklius jungiasi prie anti-rūšinių antikūnų kontrolinėje linijoje. Taigi, 2 eilučių aptikimas ant bandymo juostelės yra teigiamas tyrimo rezultatas. Jei mėginyje nėra analitės, konjugatas jungiasi su anti-rūšiniais antikūnais tik ant kontrolinės linijos, sudarydamas vieną liniją ant tyrimo juostelės. Metodas tiesioginis IHA naudojamas aptikti stambiamolekulinius junginius – virusus, įsk. ŽIV; įvairūs hormonai (pavyzdžiui, nėštumo testuose), infekcinių ligų sukėlėjai.
Metodas konkurencingas IHA, naudojamas mažos molekulinės masės junginiams nustatyti, yra pagrįstas analitės ir imobilizuoto analitės: baltymo nešiklio konjugato konkurencija dėl riboto skaičiaus specifinių antikūnų surišimo vietų, esančių At-tag konjugate. Kai naudojamas mėginys, kuriame yra analitės, jis prisijungia prie At-tag konjugato ant membranos su konjugatu. Tada imunokompleksas praeina per bandymo zoną, kur imobilizuojamas analitės: nešiklio baltymo konjugatas. Imunokompleksas negali prisijungti prie šio konjugato dėl sterinių kliūčių: mažos molekulinės masės junginiai paprastai turi vieną antigeninį determinantą ir atitinkamai antikūnai turi vieną surišimo vietą antigenui, kuris jau yra užimta analitė. Tada imuninį kompleksą suriša anti-rūšiniai antikūnai, esantys kontrolinėje linijoje. Dėl to spalvotos juostos nebuvimas bandymo zonoje ir spalvos buvimas kontrolinėje zonoje rodo, kad analitės koncentracija tiriamajame mėginyje viršija slenkstinę šio tyrimo vertę.

Jei mėginyje nėra analitės, At-tag konjugatas prisijungia prie Ar:carrier baltymo konjugato, imobilizuoto tyrimo linijos zonoje. Nesurištas At-tag konjugatas patenka į kontrolinės linijos zoną ir ten jungiasi su anti-rūšiniais antikūnais. Taigi dviejų spalvotų linijų (bandymo ir kontrolės) buvimas yra neigiamas analizės rezultatas.

Konkurencinis ICA formatas naudojamas mažos molekulinės masės junginiams, įskaitant narkotinių junginių metabolitus šlapime, burnos skystyje ir audinių ekstraktuose, aptikti.

Taip pat yra instrumentiniai pusiau kiekybiniai ir kiekybiniai ICA formatai, kuriuose naudojami specialūs skaitytuvai, fiksuojantys etiketės intensyvumą tyrimo juostelės tyrimo zonoje.

Šiuolaikinėje medicinos praktikoje vaidmuo laboratorinė diagnostika kaip pagrindinė diagnostikos ir gydymo stebėjimo priemonė. Vienas iš sparčiai besivystančių ir populiarių laboratorinės diagnostikos metodų yra imunochromatografinė analizė.

IMUNOCHROMATOGRAFINĖ ANALIZĖ (ICA) – tai tam tikrų medžiagų koncentracijų nustatymo biologinėse medžiagose (šlapime, visame kraujyje, serume ar plazmoje, seilėse, išmatose ir kt.) metodas. Šio tipo analizė atliekama naudojant indikatoriaus juosteles, lazdeles, plokštes ar testavimo kasetes, kurios užtikrina tyrimo greitį.IHA yra gana jaunas analizės metodas, literatūroje dažnai įvardijamas kaip sausosios imunochemijos metodas, juostelė. testas, QuikStrip kasetė, QuikStrip matuoklis, greitasis testas arba greitoji analizė. Šie pavadinimai siejami su šio analizės metodo sparta.

Imunochromatografinio tyrimo veikimo principas yra tas, kad panardinus testą į fiziologinį skystį, jis pagal plonasluoksnės chromatografijos principą pradeda migruoti juostele. Mobilioji fazė šiuo atveju yra fiziologinis skystis. Antikūnai su dažais taip pat juda kartu su skysčiu. Jeigu šiame skystyje yra tiriamo antigeno (hormono, infekcinio ar onkologinio žymens), tai jis jungiasi ir su pirmo, ir su antrojo tipo antikūnais, o tai jau yra imunologinis analizės metodas. Tokiu atveju antikūnai su dažais kaupiasi aplink standžiai imobilizuotus antikūnus ICA juostelės tyrimo srityje, kuri atrodo kaip ryški tamsi juosta. Nesusieti antikūnai su dažais migruoja toliau palei juostelę ir neišvengiamai sąveikauja su antriniais antikūnais kontrolinėje zonoje, kur pastebima antroji tamsi juostelė. Sąveika (ir tamsi juosta) kontrolinėje zonoje turi atsirasti visada (jei analizė atlikta teisingai), nepaisant tiriamojo antigeno buvimo fiziologiniame skystyje (žr. 1 pav.). Rezultatai nustatomi vizualiai arba kompiuterinis apdorojimas nuskaitytas vaizdas.

Imunologinis analizės metodas pagrįstas reakcija tarp antigeno ir jį atitinkančio antikūno. Antigenas yra svetima žmogaus organizmui medžiaga, kuri gali sukelti Imuninė sistema (gynybinė reakcija). Antikūnai yra baltymai, kuriuos išskiria mūsų kūno ląstelės, kai į jį patenka antigenas. Imuninės chromatografijos metodas pagrįstas ypatinga antikūnų savybe specifiniu (tai yra selektyviu) būdu prisijungti prie antigeno. Tai reiškia, kad kiekvienas antikūnas atpažįsta ir jungiasi tik prie konkretaus antigeno. Visi imunologiniai analizės metodai, įskaitant ICA, yra pagrįsti šia unikalia antikūnų savybe. Be to, apibrėžtas „antigenas“ yra šis metodas Biomedžiagoje nustatytas antikūnas prieš infekcinį agentą arba autoantikūnas taip pat gali būti naudojamas kaip analizė, tada likę tyrime naudojami antikūnai bus anti-antikūnai. ICA tyrimuose naudojami trijų tipų antikūnai.

Tirpūs monokloniniai antikūnai prieš tiriamą antigeną arba antikūną, konjuguoti ("susiejimai") su koloidiniu auksu – dažais, kuriuos galima lengvai identifikuoti net esant mažiausioms koncentracijoms. Šie antikūnai dedami šalia tos vietos, kur tyrimo juostelė panardinta į fiziologinį skystį (šlapimą, kraują).
Polikloniniai antikūnai prieš tiriamą antigeną arba antikūną, standžiai imobilizuoti juostelės tyrimo zonoje.
Antriniai antikūnai prieš monokloninius antikūnus, tvirtai imobilizuoti tyrimo juostelės kontrolinėje zonoje.

Narkotikų testų veikimo principas kiek skiriasi nuo kitų testavimo sistemų. ICA juostelės įtaisas skiriasi tuo, kad bandymo zonoje yra imobilizuoti dirbtiniai antigenai, galintys specifiškai prisijungti prie laisvųjų antikūnų. Jei tiriamojo antigeno (vaisto) fiziologiniame skystyje NĖRA, antikūnų surišimo vietos (epitopai) lieka laisvos ir jos gali prisijungti prie dirbtinių antigenų tiriamojoje zonoje, dėl konjuguoto dažiklio suformuodamos tamsią juostą. Atitinkamai, jei tiriamojo antigeno yra skystyje, antikūnai, su juo kontaktavę, nebegali sąveikauti su antigenais tiriamojoje zonoje ir ten nesusidaro tamsi juosta. Tačiau abiem atvejais (jei analizė atlikta teisingai) „nudažyti“ antikūnai prisijungia prie antrinių antikūnų kontrolinėje zonoje ir sudaro tamsią juostelę. Galimi variantai analizės metu: viena juosta – teigiamas rezultatas, dvi juostos – neigiamas rezultatas, juostų nėra – analizė atlikta neteisingai.

Pagrindiniai imunochromatografinių bandymo juostelių naudojimo pranašumai yra šie:

1. Paprastumas ir patogumas - leidžia gauti rezultatą (analizę ir pradinę ligos priežasties idėją) be įrangos ir specialių įgūdžių
2. Patikimumas - testų patikimumas siekia 92-99,8%, o kiekviename teste yra įmontuota vidinė kontrolė
3. Pelningumas – minimalios išlaidos testo įsigijimui ir laiko sutaupymas apklausai. Mažmeninėje prekyboje vieno ELISA tyrimo kaina yra 5-10 kartų brangesnė nei ICA, o rezultatas gaunamas bent jau kitą dieną
4. Anonimiškumas – tai ypač svarbu nustatant lytiniu keliu plintančias ligas, kitas infekcines ligas, taip pat nustatant narkotikų vartojimo faktus
5. Nepriklausomybė – nereikia išankstinės medicininės konsultacijos ar recepto

Esamas veiksminga priemonė diagnostika, greitieji testai leidžia vizualiai nustatyti ir per kelias minutes įvertinti antigenų, antikūnų, hormonų ir kitų diagnostiškai svarbių medžiagų kiekį žmogaus organizme. Greitieji testai išsiskiria dideliu jautrumu ir tikslumu, nustatant daugiau nei 100 ligų rūšių, įskaitant tokias įprastas ligas kaip tuberkuliozė, sifilis, chlamidijos, Skirtingos rūšys virusinis hepatitas ir kt., taip pat visas suvartotų narkotinių medžiagų spektras, pasižymintis dideliu nustatymo patikimumu. Svarbus šio tipo tyrimų privalumas – jų naudojimas in vitro diagnostikoje, kuriai nereikia tiesioginio tiriamo paciento buvimo.

Tačiau imunochromatografinės bandymo juostelės nėra be trūkumų. Tai susiję su testų patikimumu, jautrumu ir ekonomiškumu. Patikimumas ir jautrumas priklauso, pirma, nuo tyrime naudojamų monokloninių antikūnų kokybės ir, antra, nuo antigeno koncentracijos biomedžiagoje. Monokloninių antikūnų kokybė priklauso nuo jų paruošimo, gryninimo ir fiksavimo ant nešiklio metodų. Antigeno koncentracija priklauso nuo ligos stadijos ir biomedžiagos kiekio. Biomedžiagos kiekis ypač svarbus, kai naudojamas visas kraujas. Šiuo atveju reikšmingą vaidmenį atlieka hematokritas, t.y. plazmos ir suformuotų elementų santykis. Esant dideliam hematokritui, sumažėja plazmos su antigenu, migruojančiu palei juostelę, kiekis. Temperatūra, nuo kurios priklauso antikūno sąveikos su antigenu greitis, yra svarbi tik tyrimo metu. Akivaizdu, kad nėra prasmės naudoti juosteles esant žemesnei nei vandens užšalimo temperatūrai, kuri sudaro pagrindinę biomedžiagos dalį.

Rimtų abejonių kelia greitųjų testų naudojimo ekonomiškumas biudžetinėse medicinos organizacijose, kurios užsiima masinėmis gyventojų medicininėmis apžiūromis ir yra tiesiog patogios ir būtinos sudėtingoms testo juostelių juostelių sistemoms, skirtoms įvairių ligų patikrai. Taip yra dėl mažų analizės išlaidų pagal biudžeto tarifus. Tuo pačiu metu bandymo juostelės kaina kai kuriais atvejais yra 10 kartų didesnė nei analizės kaina.

Bibliografija.

Wennig R, Moeller MR, Haguenoer JM ir kt. (1998) Imunochromatografinių greitųjų testų, skirtų kanabinoidų, kokaino ir opiatų atrankai šlapime, kūrimas ir įvertinimas // J. Anal. Toksikolis. — V.22 — P.148-155
Coons, S.J. Pažvelkite į namų nėštumo testų rinkinių pirkimą ir naudojimą. Am Pharm. NS29:46-48, 1989.
Bastianas, L. A., Nanda, K., Hasselblad, V. ir Simel, D. L. Namų nėštumo testų rinkinių diagnostinis efektyvumas. Metaanalizė. Arch.Fam.Med. 7:465-469, 1998.
Latmanas, N.S. ir Bruot, B.C. Namų nėštumo testų rinkinių įvertinimas. Biomed.Instrum.Technol. 23:144-149, 1989.
Hicks, J.M. ir Iosefsohn, M. Namų nėštumo testų rinkinių patikimumas neprofesionalų rankose. N.Engl.J.Med. 320:320-321, 1989.
Torlesse, H., Wurie, I. M. ir Hodges, M. Imunochromatografijos testo kortelių naudojimas diagnozuojant hepatito B paviršiaus antigeną nėščioms moterims Vakarų Afrikoje. Br.J.Biomed.Sci. 54:256-259, 1997.
Sato, K., Ichiyama, S., Iinuma, Y., Nada, T., Shimokata, K. ir Nakashima, N. Imunochromatografinių tyrimų sistemų, skirtų greitam hepatito B paviršiaus antigeno ir antikūnų, Dainascreen HBsAg ir Dainascreen aptikimui, įvertinimas ausab. J. Clin. Microbiol. 34:1420-1422, 1996 m.
Lein, M., Jung, K., Schnorr, D., Henke, W., Brux, B. ir Loening, S.A. Greitas PSA patikrinimas: imunocheminės membranos juostelės testo įvertinimas. Clin.Chem. 41:1545-1547, 1995.
Anderson, J.C., Cheng, E., Roeske, M., Marchildon, P., Peacock, J. ir Shaw, R.D. Serumo antikūnų prieš Helicobacter pylori nustatymas imunochromatografiniu metodu. Am. J. Gastroenterolis. 92:1135-1139, 1997.
Schrier, W. H., Schoengold, R. J., Baker, J. T., Norell, J. L., Jaseph, C. L., Okin, Y., Doe, J. Y. ir Chandler, H. FlexSure HP kūrimas – imunochromatografinis metodas antikūnams prieš Helicobacter pylori aptikti. Clin.Chem. 44:293-298, 1998.
Cognein, P., Costa, A. ir Giacosa, A. Helicobacter pylori serodiagnosis: greito, miniatiūrinio imunochromatografinio testo įvertinimas. Eur.J.Vėžys.Ankst. 3:457-463, 1994.
Shirin, H., Bruck, R., Kenet, G., Krepel, Z., Wardi, Y., Reif, S., Zaidel, L., Geva, D., Avni, Y. ir Halpern, Z. Naujo imunochromatografinio tyrimo, skirto Helicobacter pylori IgG antikūnams nustatyti senyviems simptominiams pacientams, įvertinimas. J. Gastroenterolis. 34:7-10, 1999.
Kagen, L. J. 1973 Mioglobinas: Biocheminiai, fiziologiniai ir klinikiniai aspektai. Niujorko ir Londono Kolumbijos universiteto leidykla.
Drexel, H. ir kt. 1983 Mioglobinemija ankstyvoje ūminio miokardo infarkto diagnozėje. Esu. Heart J. 105: 642-651.
McComb, J. M. ir kt. 1983 Mioglobinas labai ankstyvoje ūminio miokardo infarkto fazėje. Annos klinika. Biochem, 22:152-155.
Grenardier, E., Keidar, S., Kahana, L., Alpan, G., Marmur, A., Palant, A. 1983 Serumo mioklobino, bendrojo CPK ir CK-MB izofermento vaidmuo ūminėje miokardo fazėje infarktas. Esu. Heart J. 105:408-416.
Ellis A.K., Saran, B.R. 1989 Mioolobino išsiskyrimo kinetika ir miokardo mioglobino sumažėjimo prognozė po vainikinių arterijų reperfuzijos. Tiražas 80: 676-682.
McComb, J.M. ir kt. 1984 Mioglobinas ir kreatino kinazė sergant ūminiu miokardo infarktu. Br. Heart J. 51:189-194.
Struyf, F., Lemmens, A., Valadas, E., Verhaegen, J., and Van Ranst, M. Imunochromatografinio antikūnų prieš Mycobacterium tuberculosis aptikimo, kaip papildomo dažymo auraminu, naudingumas greitai diagnozuojant tuberkuliozę sergant mažu paplitimo nustatymas. Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 18:740-742, 1999.
Abe, C., Hirano, K. ir Tomiyama, T. Paprastas ir greitas Mycobacterium tuberculosis komplekso identifikavimas imunochromatografiniu tyrimu, naudojant anti-MPB64 monokloninius antikūnus. J. Clin. Microbiol. 37:3693-3697, 1999.
Edmundas C. Tramontas. Traponema pallidum (sifilis). Mandell, Douglas ir Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases. G. L. Mandell, J. E. Bennett, P. Dolin, red. Churchill Livingston, Niujorkas, 1995 m.
Steven J. Norris ir Sandra Alarsen, Traponema ir kitos su šeimininku susijusios spirochemetos klinikinės mikrobiologijos vadove. P. Murray, E.J. Baronas, M.A. Pfalleris, FC Tenoveris, R.H. Yoken, red., ASM Press, Vašingtonas, D.C. 1995 metai.
Larsenas, S.A., E.F. Hunter ir S.J. Drausas (red.) 1990. Sifilio tyrimų vadovas, 8-asis leidimas. Amerikos visuomenės sveikatos asociacija, Vašingtonas, D.C.

Šiuolaikinėje medicinos praktikoje laboratorinės diagnostikos, kaip pagrindinės diagnozavimo ir gydymo stebėjimo priemonės, vaidmuo kasmet auga. Vienas iš sparčiai besivystančių ir populiarių laboratorinės diagnostikos metodų yra imunochromatografinė analizė.

IMUNOCHROMATOGRAFINĖ ANALIZĖ (ICA) – tai tam tikrų medžiagų koncentracijų nustatymo biologinėse medžiagose (šlapime, visame kraujyje, serume ar kraujo plazmoje, seilėse, išmatose ir kt.) metodas. Šio tipo analizė atliekama naudojant indikatoriaus juosteles, pagaliukus, skydelius ar testavimo kasetes, kurios užtikrina testavimo greitį. ICA yra palyginti jaunas analizės metodas, literatūroje jis dažnai vadinamas ir sausosios imunochemijos metodu, juostiniu testu, QuikStrip kasetėmis, QuikStrip matuokliu, greituoju testu arba greitąja analize. Šie pavadinimai siejami su šio analizės metodo sparta.

Imunologinis analizės metodas pagrįstas reakcija tarp antigeno ir jį atitinkančio antikūno. Antigenas yra svetima žmogaus organizmui medžiaga, kuri gali sukelti imuninę sistemą (gynybos reakciją). Antikūnai yra baltymai, kuriuos išskiria mūsų kūno ląstelės, kai į jį patenka antigenas. Imuninės chromatografijos metodas pagrįstas ypatinga antikūnų savybe specifiniu (tai yra selektyviu) būdu prisijungti prie antigeno. Tai reiškia, kad kiekvienas antikūnas atpažįsta ir jungiasi tik prie konkretaus antigeno. Visi imunologiniai analizės metodai, įskaitant ICA, yra pagrįsti šia unikalia antikūnų savybe. Be to, šiuo analizės metodu nustatytas „antigenas“ taip pat gali būti antikūnas, nustatytas biomedžiagoje prieš infekcinį agentą arba autoantikūnas, tada likę tyrime naudojami antikūnai bus antikūnai. ICA tyrimuose naudojami trijų tipų antikūnai.

Tirpūs monokloniniai antikūnai prieš tiriamą antigeną arba antikūną, konjuguoti ("susiejimai") su koloidiniu auksu – dažais, kuriuos galima lengvai identifikuoti net esant mažiausioms koncentracijoms. Šie antikūnai dedami šalia tos vietos, kur tyrimo juostelė panardinta į fiziologinį skystį (šlapimą, kraują).
Polikloniniai antikūnai prieš tiriamą antigeną arba antikūną, standžiai imobilizuoti juostelės tyrimo zonoje.
Antriniai antikūnai prieš monokloninius antikūnus, tvirtai imobilizuoti tyrimo juostelės kontrolinėje zonoje.

Narkotikų testų veikimo principas kiek skiriasi nuo kitų testavimo sistemų. ICA juostelės įtaisas skiriasi tuo, kad bandymo zonoje yra imobilizuoti dirbtiniai antigenai, galintys specifiškai prisijungti prie laisvųjų antikūnų. Jei tiriamojo antigeno (vaisto) fiziologiniame skystyje NĖRA, antikūnų surišimo vietos (epitopai) lieka laisvos ir jos gali prisijungti prie dirbtinių antigenų tiriamojoje zonoje, dėl konjuguoto dažiklio suformuodamos tamsią juostą. Atitinkamai, jei tiriamojo antigeno yra skystyje, antikūnai, su juo kontaktavę, nebegali sąveikauti su antigenais tiriamojoje zonoje ir ten nesusidaro tamsi juosta. Bet abiem atvejais (jei analizė atlikta teisingai) „nudažyti“ antikūnai prisijungia prie antrinių antikūnų kontrolinėje zonoje ir sudaro tamsią juostelę. Galimi variantai analizės metu: viena juosta – teigiamas rezultatas, dvi juostos – neigiamas rezultatas, juostų nėra – analizė atlikta neteisingai.

Pagrindiniai imunochromatografinių bandymo juostelių naudojimo pranašumai yra šie:

Paprastumas ir patogumas - leidžia gauti rezultatą (analizę ir pradinę ligos priežasties idėją) be įrangos ir specialių įgūdžių
Patikimumas - testų patikimumas siekia 92-99,8%, o kiekviename teste yra įmontuota vidinė kontrolė
Pelningumas – minimalios išlaidos testo įsigijimui ir laiko sutaupymas apklausai. Mažmeninėje prekyboje vieno ELISA tyrimo kaina yra 5-10 kartų brangesnė nei ICA, o rezultatas gaunamas bent jau kitą dieną
Anonimiškumas – tai ypač svarbu nustatant lytiniu keliu plintančias ligas, kitas infekcines ligas, taip pat nustatant narkotikų vartojimo faktus
Nepriklausomybė – nereikia išankstinės medicininės konsultacijos ar recepto

Greitieji testai, būdami efektyvia diagnostikos priemone, leidžia vizualiai nustatyti ir įvertinti antigenų, antikūnų, hormonų ir kitų diagnostiškai svarbių medžiagų kiekį žmogaus organizme per kelias minutes. Greitieji testai išsiskiria dideliu jautrumu ir tikslumu, nustatant daugiau nei 100 ligų rūšių, tarp jų ir tokias įprastas ligas kaip tuberkuliozė, sifilis, gonorėja, chlamidijos, įvairių tipų virusiniai hepatitai ir kt. vaistai, vartojami su dideliu aptikimo patikimumu. Svarbus šio tipo tyrimų privalumas – jų naudojimas in vitro diagnostikoje, kuriai nereikia tiesioginio tiriamo paciento buvimo.

Bibliografija.

Wennig R, Moeller MR, Haguenoer JM ir kt. (1998) Imunochromatografinių greitųjų testų, skirtų kanabinoidų, kokaino ir opiatų atrankai šlapime, kūrimas ir įvertinimas // J. Anal. Toksikolis. - V.22 - P.148-155
Coons, S.J. Pažvelkite į namų nėštumo testų rinkinių pirkimą ir naudojimą. Am Pharm. NS29:46-48, 1989.
Bastianas, L. A., Nanda, K., Hasselblad, V. ir Simel, D. L. Namų nėštumo testų rinkinių diagnostinis efektyvumas. Metaanalizė. Arch.Fam.Med. 7:465-469, 1998.
Latmanas, N.S. ir Bruot, B.C. Namų nėštumo testų rinkinių įvertinimas. Biomed.Instrum.Technol. 23:144-149, 1989.
Hicks, J.M. ir Iosefsohn, M. Namų nėštumo testų rinkinių patikimumas neprofesionalų rankose. N.Engl.J.Med. 320:320-321, 1989.
Torlesse, H., Wurie, I. M. ir Hodges, M. Imunochromatografijos testo kortelių naudojimas diagnozuojant hepatito B paviršiaus antigeną nėščioms moterims Vakarų Afrikoje. Br.J.Biomed.Sci. 54:256-259, 1997.
Sato, K., Ichiyama, S., Iinuma, Y., Nada, T., Shimokata, K. ir Nakashima, N. Imunochromatografinių tyrimų sistemų, skirtų greitam hepatito B paviršiaus antigeno ir antikūnų, Dainascreen HBsAg ir Dainascreen aptikimui, įvertinimas ausab. J. Clin. Microbiol. 34:1420-1422, 1996 m.
Lein, M., Jung, K., Schnorr, D., Henke, W., Brux, B. ir Loening, S.A. Greitas PSA patikrinimas: imunocheminės membranos juostelės testo įvertinimas. Clin.Chem. 41:1545-1547, 1995.
Anderson, J.C., Cheng, E., Roeske, M., Marchildon, P., Peacock, J. ir Shaw, R.D. Serumo antikūnų prieš Helicobacter pylori nustatymas imunochromatografiniu metodu. Am. J. Gastroenterolis. 92:1135-1139, 1997.
Schrier, W. H., Schoengold, R. J., Baker, J. T., Norell, J. L., Jaseph, C. L., Okin, Y., Doe, J. Y. ir Chandler, H. FlexSure HP kūrimas – imunochromatografinis metodas antikūnams prieš Helicobacter pylori aptikti. Clin.Chem. 44:293-298, 1998.
Cognein, P., Costa, A. ir Giacosa, A. Helicobacter pylori serodiagnosis: greito, miniatiūrinio imunochromatografinio testo įvertinimas. Eur.J.Vėžys.Ankst. 3:457-463, 1994.
Shirin, H., Bruck, R., Kenet, G., Krepel, Z., Wardi, Y., Reif, S., Zaidel, L., Geva, D., Avni, Y. ir Halpern, Z. Naujo imunochromatografinio tyrimo, skirto Helicobacter pylori IgG antikūnams nustatyti senyviems simptominiams pacientams, įvertinimas. J. Gastroenterolis. 34:7-10, 1999.
Kagen, L. J. 1973 Mioglobinas: Biocheminiai, fiziologiniai ir klinikiniai aspektai. Niujorko ir Londono Kolumbijos universiteto leidykla.
Drexel, H. ir kt. 1983 Mioglobinemija ankstyvoje ūminio miokardo infarkto diagnozėje. Esu. Heart J. 105: 642-651.
McComb, J. M. ir kt. 1983 Mioglobinas labai ankstyvoje ūminio miokardo infarkto fazėje. Annos klinika. Biochem, 22:152-155.
Grenardier, E., Keidar, S., Kahana, L., Alpan, G., Marmur, A., Palant, A. 1983 Serumo mioklobino, bendrojo CPK ir CK-MB izofermento vaidmuo ūminėje miokardo fazėje infarktas. Esu. Heart J. 105:408-416.
Ellis A.K., Saran, B.R. 1989 Mioolobino išsiskyrimo kinetika ir miokardo mioglobino sumažėjimo prognozė po vainikinių arterijų reperfuzijos. Tiražas 80: 676-682.
McComb, J.M. ir kt. 1984 Mioglobinas ir kreatino kinazė sergant ūminiu miokardo infarktu. Br. Heart J. 51:189-194.
Struyf, F., Lemmens, A., Valadas, E., Verhaegen, J., and Van Ranst, M. Imunochromatografinio antikūnų prieš Mycobacterium tuberculosis aptikimo, kaip papildomo dažymo auraminu, naudingumas greitai diagnozuojant tuberkuliozę sergant mažu paplitimo nustatymas. Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 18:740-742, 1999.
Abe, C., Hirano, K. ir Tomiyama, T. Paprastas ir greitas Mycobacterium tuberculosis komplekso identifikavimas imunochromatografiniu tyrimu, naudojant anti-MPB64 monokloninius antikūnus. J. Clin. Microbiol. 37:3693-3697, 1999.
Edmundas C. Tramontas. Traponema pallidum (sifilis). Mandell, Douglas ir Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases. G. L. Mandell, J. E. Bennett, P. Dolin, red. Churchill Livingston, Niujorkas, 1995 m.
Steven J. Norris ir Sandra Alarsen, Traponema ir kitos su šeimininku susijusios spirochemetos klinikinės mikrobiologijos vadove. P. Murray, E.J. Baronas, M.A. Pfalleris, FC Tenoveris, R.H. Yoken, red., ASM Press, Vašingtonas, D.C. 1995 metai.
Larsenas, S.A., E.F. Hunter ir S.J. Drausas (red.) 1990. Sifilio tyrimų vadovas, 8-asis leidimas. Amerikos visuomenės sveikatos asociacija, Vašingtonas, D.C.

Imunochromatografinė analizė

Imunochromatografinė analizė (ICA) - imunocheminis metodas analizė, pagrįsta plonasluoksnės chromatografijos principu ir apimanti reakciją tarp antigeno ir jį atitinkančio antikūno biologinėse medžiagose. Tai atliekama naudojant specialias bandymo juosteles, plokštes arba bandymo kasetes.

Metodo esmė

Veikimo principas toks, kad testo juostelę panardinus į biologinį skystį (ar kitą skysčio mėginį), ji pagal plonasluoksnės chromatografijos principą pradeda migruoti palei juostelę. Kartu su juo juda ant bandymo juostelės dugno užtepti pažymėti specifiniai antikūnai, kurie afinitetu jungiasi prie analitės.

Yra 2 ICA formatai: tiesioginis ir konkurencinis metodas.

1. Schemoje tiesioginis(sumuštinis) IHA ant konjugato membranos naudojamas konjugatas su antikūnais. Šiai analitei specifiniai antikūnai yra imobilizuojami ant tyrimo linijos, o anti-rūšiniai antikūnai, būdingi pirminiams antikūnams, imobilizuojami ant kontrolinės linijos. Kai naudojamas mėginys, kuriame yra analitės, kai mėginys su konjugatu patenka į membraną, analitė prisijungia prie At-tag konjugato. Tada imuninis kompleksas patenka į tyrimo zoną, kur prisijungia prie specifinių antikūnų, sudarydamas Ab-Ag-Ab etiketės „sumuštinį“. nesurišto konjugato perteklius jungiasi su anti-rūšiniais antikūnais kontrolinėje linijoje. Taigi, 2 eilučių aptikimas ant bandymo juostelės yra teigiamas tyrimo rezultatas. Jei mėginyje nėra analitės, konjugatas jungiasi su anti-rūšiniais antikūnais tik ant kontrolinės linijos, sudarydamas vieną liniją ant tyrimo juostelės.

Tiesioginis ICA metodas naudojamas aptikti stambiamolekulinius junginius – virusus, įsk. ŽIV; įvairūs hormonai (pavyzdžiui, nėštumo testuose), infekcinių ligų sukėlėjai.

2. Metodas konkurencingas IHA, naudojamas mažos molekulinės masės junginiams nustatyti, yra pagrįstas konkurencija tarp analitės ir imobilizuoto analitės: baltymo nešiklio konjugato dėl riboto skaičiaus specifinių antikūnų surišimo vietų, esančių At-tag konjugate. Kai naudojamas mėginys, kuriame yra analitės, jis prisijungia prie At-tag konjugato ant membranos su konjugatu. Tada imunokompleksas praeina per tyrimo sritį, kur imobilizuojamas analitės: nešiklio baltymo kongatas. Imunokompleksas negali prisijungti prie šio konjugato dėl sterinių kliūčių: mažos molekulinės masės junginiai paprastai turi vieną antigeninį determinantą ir atitinkamai antikūnai turi vieną surišimo vietą antigenui, kuris jau yra užimta analitė. Tada imuninį kompleksą suriša anti-rūšiniai antikūnai, esantys kontrolinėje linijoje. Dėl to spalvotos juostos nebuvimas bandymo zonoje ir spalvos buvimas kontrolinėje zonoje rodo, kad analitės koncentracija tiriamajame mėginyje viršija slenkstinę šio tyrimo vertę. Jei mėginyje nėra analitės, At-tag konjugatas prisijungia prie Ar:carrier baltymo konjugato, imobilizuoto tyrimo linijos zonoje. Nesurištas At-tag konjugatas patenka į kontrolinės linijos zoną ir ten jungiasi su anti-rūšiniais antikūnais. Taigi dviejų spalvotų linijų (bandymo ir kontrolės) buvimas yra neigiamas analizės rezultatas.

Konkurencinis ICA formatas naudojamas mažos molekulinės masės junginiams, įskaitant narkotinių junginių metabolitus šlapime, burnos skystyje ir audinių ekstraktuose, aptikti.

Metodo privalumas – greitis ir naudojimo paprastumas, galimybė naudoti neinstrumentinius ICA formatus vizualiai įvertinant analizės rezultatą. Šiuo atveju nereikia jokios įrangos ir analizę gali atlikti ne specialistas bet kokiomis sąlygomis, įskaitant. "laukas". Taip pat yra instrumentiniai pusiau kiekybiniai ir kiekybiniai ICA formatai, kuriuose naudojami specialūs skaitytuvai, fiksuojantys etiketės intensyvumą tyrimo juostelės tyrimo zonoje.

Žymos, naudojamos IHA

Kaip etiketės ICA, naudojamos įvairios dalelės, turinčios šias savybes:

1. Dažikliai (koloidinio aukso ar anglies nanodalelės arba spalvoto latekso dalelės). Šiuo atveju naudojamas vizualinis rezultato aptikimas arba instrumentinis kolorimetrinis nustatymas (arba skenavimas). Naudojant skirtingų spalvų etiketes, pritvirtintas prie latekso dalelių, galima atlikti daugialypę analizę, kurioje linijos skirtinga spalva atitinka skirtingas analites. Dažniausiai naudojama etiketė yra koloidinio aukso nanodalelės.

2 puslapis iš 3

Imunochromatografinis testas

Imunologinis analizės metodas pagrįstas reakcija tarp antigeno ir jį atitinkančio antikūno. Antigenas yra svetima žmogaus organizmui medžiaga, kuri gali sukelti imuninę sistemą (gynybos reakciją). Antikūnai yra baltymai, kuriuos išskiria mūsų kūno ląstelės, kai į jį patenka antigenas. Imuninės chromatografijos metodas pagrįstas ypatinga antikūnų savybe specifiniu (tai yra selektyviu) būdu prisijungti prie antigeno. Tai reiškia, kad kiekvienas antikūnas atpažįsta ir jungiasi tik prie konkretaus antigeno. Visi imunologiniai analizės metodai, įskaitant ICA, yra pagrįsti šia unikalia antikūnų savybe. Be to, šiuo analizės metodu nustatytas „antigenas“ taip pat gali būti antikūnas prieš infekcinį agentą arba biomedžiagoje nustatytas autoantikūnas, tada likę tyrime naudojami antikūnai bus antikūnai. ICA tyrimuose naudojami trijų tipų antikūnai.

1. Tirpūs monokloniniai antikūnai prieš tiriamą antigeną arba antikūną, konjuguoti ("susiejimai") su koloidiniu auksu – dažais, kuriuos galima lengvai atpažinti net ir esant mažiausioms koncentracijoms. Šie antikūnai dedami šalia tos vietos, kur tyrimo juostelė panardinta į fiziologinį skystį (šlapimą, kraują).

2. Polikloniniai antikūnai prieš tiriamąjį antigeną arba antikūną, standžiai imobilizuoti juostelės tyrimo zonoje.

3. Antriniai antikūnai prieš monokloninius antikūnus, standžiai imobilizuoti tyrimo juostelės kontrolinėje zonoje.

Narkotikų testų veikimo principas kiek skiriasi nuo kitų testavimo sistemų. ICA juostelės įtaisas skiriasi tuo, kad bandymo zonoje yra imobilizuoti dirbtiniai antigenai, galintys specifiškai prisijungti prie laisvųjų antikūnų. Jei tiriamojo antigeno (vaisto) fiziologiniame skystyje NĖRA, antikūnų surišimo vietos (epitopai) lieka laisvos ir jos gali prisijungti prie dirbtinių antigenų tiriamojoje zonoje, dėl konjuguoto dažiklio suformuodamos tamsią juostą. Atitinkamai, jei tiriamojo antigeno yra skystyje, antikūnai, su juo kontaktavę, nebegali sąveikauti su antigenais tiriamojoje zonoje ir ten nesusidaro tamsi juosta. Bet abiem atvejais (jei analizė atlikta teisingai) „nudažyti“ antikūnai prisijungia prie antrinių antikūnų kontrolinėje zonoje ir sudaro tamsią juostelę. Galimi variantai analizės metu: viena juosta – teigiamas rezultatas, dvi juostos – neigiamas rezultatas, juostų nėra – analizė atlikta neteisingai.

Pagrindiniai imunochromatografinių bandymo juostelių naudojimo pranašumai yra šie:

1) Paprastumas ir patogumas - leidžia gauti rezultatą (analizę ir pradinę ligos priežasties idėją) be įrangos ir specialių įgūdžių

2) Patikimumas - testų patikimumas siekia 92-99,8%, tuo tarpu kiekvienas testas turi įmontuotą vidinę kontrolę

3) Pelningumas – minimalios testo įsigijimo išlaidos ir laiko sutaupymas tyrimui. Mažmeninėje prekyboje vieno ELISA tyrimo kaina yra 5-10 kartų brangesnė nei ICA, o rezultatas gaunamas bent jau kitą dieną

4) Anonimiškumas – tai ypač svarbu nustatant lytiniu keliu plintančias ligas, kitas infekcines ligas, taip pat nustatant narkotikų vartojimo faktus

5) Nepriklausomybė – nereikalauja išankstinės medicininės konsultacijos ir recepto