Imunocheminiai analizės metodai. Mokslinė elektroninė monografijų biblioteka, išleista Rusijos gamtos mokslų akademijos leidyklos

Bandymo juostelės diagrama.

Imunochromatografinė analizė (ICA)- imunocheminis analizės metodas, pagrįstas plonasluoksnės chromatografijos principu ir apimantis reakciją tarp antigeno ir jį atitinkančio antikūno biologinėse medžiagose. Tai atliekama naudojant specialias bandymo juosteles, plokštes arba bandymo kasetes.

Metodo esmė

Veikimo principas yra toks, kad kai bandymo juostelė yra panardinta į biologinis skystis(ar kitą skystą mėginį), jis pradeda migruoti juostele pagal plonasluoksnės chromatografijos principą. Kartu su juo perkelkite tuos, kuriems taikoma apatinė dalis bandymo juostelės yra paženklintos specifiniais antikūnais, kurie afinitetu jungiasi prie analitės.

Yra 2 ICA formatai: tiesioginis ir konkurencinis metodas.

Schemoje tiesioginis(sumuštinis) IHA ant konjugato membranos naudojamas konjugatas su antikūnais. Šiai analitei specifiniai antikūnai yra imobilizuojami ant tyrimo linijos, o anti-rūšiniai antikūnai, būdingi pirminiams antikūnams, imobilizuojami ant kontrolinės linijos. Kai naudojamas mėginys, kuriame yra analitės, kai mėginys su konjugatu patenka į membraną, analitė prisijungia prie At-tag konjugato. Tada imuninis kompleksas patenka į tyrimo zoną, kur prisijungia prie specifinių antikūnų, sudarydamas Ab-Ag-Ab etiketės „sumuštinį“. Nesurišto konjugato perteklius jungiasi prie anti-rūšinių antikūnų kontrolinėje linijoje. Taigi, 2 eilučių aptikimas ant bandymo juostelės yra teigiamas tyrimo rezultatas. Jei mėginyje nėra analitės, konjugatas jungiasi su anti-rūšiniais antikūnais tik ant kontrolinės linijos, sudarydamas vieną liniją ant tyrimo juostelės. Metodas tiesioginis IHA naudojamas aptikti stambiamolekulinius junginius – virusus, įsk. ŽIV; įvairūs hormonai (pavyzdžiui, nėštumo testuose), infekcinių ligų sukėlėjai.
Metodas konkurencingas IHA, naudojamas mažos molekulinės masės junginiams nustatyti, yra pagrįstas analitės ir imobilizuoto analitės: baltymo nešiklio konjugato konkurencija dėl riboto skaičiaus specifinių antikūnų surišimo vietų, esančių At-tag konjugate. Kai naudojamas mėginys, kuriame yra analitės, jis prisijungia prie At-tag konjugato ant membranos su konjugatu. Tada imunokompleksas praeina per bandymo zoną, kur imobilizuojamas analitės: nešiklio baltymo konjugatas. Imunokompleksas negali prisijungti prie šio konjugato dėl sterinių kliūčių: mažos molekulinės masės junginiai paprastai turi vieną antigeninį determinantą ir atitinkamai antikūnai turi vieną surišimo vietą antigenui, kuris jau yra užimta analitė. Tada imuninį kompleksą suriša anti-rūšiniai antikūnai, esantys kontrolinėje linijoje. Dėl to spalvotos juostos nebuvimas bandymo zonoje ir spalvos buvimas kontrolinėje zonoje rodo, kad analitės koncentracija tiriamajame mėginyje viršija slenkstinę šio tyrimo vertę.

Jei mėginyje nėra analitės, At-tag konjugatas prisijungia prie Ar:carrier baltymo konjugato, imobilizuoto tyrimo linijos zonoje. Nesurištas At-tag konjugatas patenka į kontrolinės linijos zoną ir ten jungiasi su anti-rūšiniais antikūnais. Taigi dviejų spalvotų linijų (bandymo ir kontrolės) buvimas yra neigiamas analizės rezultatas.

Konkurencinis ICA formatas naudojamas mažos molekulinės masės junginiams, įskaitant narkotinių junginių metabolitus šlapime, burnos skystyje ir audinių ekstraktuose, aptikti.

Metodo privalumas – greitis ir naudojimo paprastumas, galimybė naudoti neinstrumentinius ICA formatus vizualiai įvertinant analizės rezultatą. Šiuo atveju nereikia jokios įrangos ir analizę gali atlikti ne specialistas bet kokiomis sąlygomis, įskaitant. "laukas".

Taip pat yra instrumentiniai pusiau kiekybiniai ir kiekybiniai ICA formatai, kuriuose naudojami specialūs skaitytuvai, fiksuojantys etiketės intensyvumą tyrimo juostelės tyrimo zonoje.

Žymos, naudojamos IHA

ICA kaip etiketės naudojamos įvairios dalelės, kurios turi šias savybes:

Dažikliai (koloidinio aukso ar anglies nanodalelės arba spalvoto latekso dalelės). Šiuo atveju naudojamas vizualinis rezultato aptikimas arba instrumentinis kolorimetrinis nustatymas (arba skenavimas). Naudojant įvairias spalvinimo etiketes, pritvirtintas prie latekso dalelių, galima atlikti daugialypę analizę, kurioje linijos skirtinga spalva atitinka skirtingas analites. Dažniausiai naudojama etiketė yra koloidinio aukso nanodalelės.
Fluorescencinės, fosforescencinės ir bioliuminescencinės etiketės kovalentiškai surištos su latekso dalelėmis. Šios etiketės naudojamos tik ICA prietaisų variantuose, kai rezultatas įrašomas specialiu skaitytuvu. Tarp aukščiau išvardytų dažniausiai pasitaiko fluorescencinės etiketės.
Paramagnetinės etiketės (taip pat tvirtinamos prie latekso dalelių). Šio tipo ženklai naudojami ICA naudojant prietaisus, fiksuojančius magnetinio lauko stiprumą.
Fermentų etiketės naudojamos taip pat, kaip ir ELISA. Fermentinė reakcija registruojama dažant substratus, o analizės rezultatas yra vizualinis arba nuskaitomas naudojant skaitytuvą.
Nauja kryptis kuriant įvairius ICA tipus – liposomų, kaip įvairių rūšių (spalvojančių, fluorescencinių, fermentinių, elektroaktyvių ir kt.) nešėjų, naudojimas.

2 puslapis iš 3

Imunochromatografinis testas

Imunochromatografinio tyrimo veikimo principas yra tas, kad panardinus testą į fiziologinį skystį, jis pagal plonasluoksnės chromatografijos principą pradeda migruoti juostele. Mobilioji fazė šiuo atveju yra fiziologinis skystis. Antikūnai su dažais taip pat juda kartu su skysčiu. Jeigu šiame skystyje yra tiriamo antigeno (hormono, infekcinio ar onkologinio žymens), tai jis jungiasi ir su pirmo, ir su antrojo tipo antikūnais, o tai jau yra imunologinis analizės metodas. Tokiu atveju antikūnai su dažais kaupiasi aplink standžiai imobilizuotus antikūnus ICA juostelės tyrimo srityje, kuri atrodo kaip ryški tamsi juosta. Nesusieti antikūnai su dažais migruoja toliau palei juostelę ir neišvengiamai sąveikauja su antriniais antikūnais kontrolinėje zonoje, kur pastebima antroji tamsi juostelė. Sąveika (ir tamsi juosta) kontrolinėje zonoje turi atsirasti visada (jei analizė atlikta teisingai), nepaisant tiriamojo antigeno buvimo fiziologiniame skystyje (žr. 1 pav.). Rezultatai nustatomi vizualiai arba kompiuterinis apdorojimas nuskaitytas vaizdas.

Imunologinis analizės metodas pagrįstas reakcija tarp antigeno ir jį atitinkančio antikūno. Antigenas yra svetima žmogaus organizmui medžiaga, kuri gali sukelti Imuninė sistema (gynybinė reakcija). Antikūnai yra baltymai, kuriuos išskiria mūsų kūno ląstelės, kai į jį patenka antigenas. Imuninės chromatografijos metodas pagrįstas ypatinga antikūnų savybe specifiniu (tai yra selektyviu) būdu prisijungti prie antigeno. Tai reiškia, kad kiekvienas antikūnas atpažįsta ir jungiasi tik prie konkretaus antigeno. Visi imunologiniai analizės metodai, įskaitant ICA, yra pagrįsti šia unikalia antikūnų savybe. Be to, šiuo analizės metodu nustatytas „antigenas“ taip pat gali būti antikūnas prieš infekcinį agentą arba biomedžiagoje nustatytas autoantikūnas, tada likę tyrime naudojami antikūnai bus antikūnai. ICA tyrimuose naudojami trijų tipų antikūnai.

1. Tirpūs monokloniniai antikūnai prieš tiriamą antigeną arba antikūną, konjuguoti ("susiejimai") su koloidiniu auksu – dažais, kuriuos galima lengvai atpažinti net ir esant mažiausioms koncentracijoms. Šie antikūnai dedami šalia tos vietos, kur tyrimo juostelė panardinta į fiziologinį skystį (šlapimą, kraują).

2. Polikloniniai antikūnai prieš tiriamąjį antigeną arba antikūną, standžiai imobilizuoti juostelės tyrimo zonoje.

3. Antriniai antikūnai prieš monokloninius antikūnus, standžiai imobilizuoti tyrimo juostelės kontrolinėje zonoje.

Narkotikų testų veikimo principas kiek skiriasi nuo kitų testavimo sistemų. ICA juostelės įtaisas skiriasi tuo, kad bandymo zonoje yra imobilizuoti dirbtiniai antigenai, galintys specifiškai prisijungti prie laisvųjų antikūnų. Jei tiriamojo antigeno (vaisto) fiziologiniame skystyje NĖRA, antikūnų surišimo vietos (epitopai) lieka laisvos, jos gali prisijungti prie dirbtinių antigenų tiriamojoje zonoje, dėl konjuguoto dažiklio suformuodamos tamsią juostą. Atitinkamai, jei tiriamojo antigeno yra skystyje, antikūnai, su juo kontaktavę, nebegali sąveikauti su tiriamojoje zonoje esančiais antigenais ir ten nesusidaro tamsi juosta. Bet abiem atvejais (jei analizė atlikta teisingai) „nudažyti“ antikūnai prisijungia prie antrinių antikūnų kontrolinėje zonoje ir sudaro tamsią juostelę. Galimi variantai analizės metu: viena juosta – teigiamas rezultatas, dvi juostos – neigiamas rezultatas, juostų nėra – analizė atlikta neteisingai.

Pagrindiniai imunochromatografinių bandymo juostelių naudojimo pranašumai yra šie:

1) Paprastumas ir patogumas - leidžia gauti rezultatą (analizę ir pradinę ligos priežasties idėją) be įrangos ir specialių įgūdžių

2) Patikimumas - testų patikimumas siekia 92-99,8%, tuo tarpu kiekviename teste yra įmontuota vidinė kontrolė

3) Pelningumas – minimalios testo įsigijimo išlaidos ir laiko sutaupymas apklausai. Mažmeninėje prekyboje vieno ELISA tyrimo kaina yra 5-10 kartų brangesnė nei ICA, o rezultatas gaunamas bent jau kitą dieną

4) Anonimiškumas – tai ypač svarbu nustatant lytiniu keliu plintančias ligas, kitas infekcines ligas, taip pat nustatant narkotikų vartojimo faktus

5) Nepriklausomybė – nereikalauja išankstinės medicininės konsultacijos ir recepto

Esamas veiksminga priemonė diagnostika, greitieji testai leidžia per kelias minutes vizualiai nustatyti ir įvertinti antigenų, antikūnų, hormonų ir kitų diagnostiškai svarbių medžiagų kiekį žmogaus organizme. Greitieji testai išsiskiria dideliu jautrumu ir tikslumu, nustatant daugiau nei 100 ligų rūšių, įskaitant tokias įprastas ligas kaip tuberkuliozė, sifilis, gonorėja, chlamidijos, Skirtingos rūšys virusinis hepatitas ir kt., taip pat visas suvartotų narkotinių medžiagų spektras, pasižymintis dideliu nustatymo patikimumu. Svarbus šio tipo tyrimų privalumas – jų naudojimas in vitro diagnostikoje, kuriai nereikia tiesioginio tiriamo paciento buvimo.

Tačiau imunochromatografinės bandymo juostelės nėra be trūkumų. Tai susiję su testų patikimumu, jautrumu ir ekonomiškumu. Patikimumas ir jautrumas priklauso, pirma, nuo tyrime naudojamų monokloninių antikūnų kokybės ir, antra, nuo antigeno koncentracijos biomedžiagoje. Monokloninių antikūnų kokybė priklauso nuo jų paruošimo, gryninimo ir fiksavimo ant nešiklio metodų. Antigeno koncentracija priklauso nuo ligos stadijos ir biomedžiagos kiekio. Biomedžiagos kiekis ypač svarbus, kai naudojamas visas kraujas. Šiuo atveju reikšmingą vaidmenį atlieka hematokritas, t.y. plazmos ir suformuotų elementų santykis. Esant dideliam hematokritui, sumažėja plazmos su antigenu, migruojančiu palei juostelę, kiekis. Temperatūra, nuo kurios priklauso antikūno sąveikos su antigenu greitis, yra svarbi tik tyrimo metu. Akivaizdu, kad nėra prasmės naudoti juosteles esant žemesnei nei vandens, kuri yra pagrindinė biomedžiagos dalis, užšalimo temperatūra.

Rimtų abejonių kelia greitųjų testų naudojimo ekonomiškumas biudžetinėse medicinos organizacijose, kurios užsiima masinėmis gyventojų medicininėmis apžiūromis ir kurios yra tiesiog patogios ir reikalingos sudėtingos juostelių sistemos iš testo juostelių, skirtų įvairių ligų patikrai. Taip yra dėl mažų analizės išlaidų pagal biudžeto tarifus. Tuo pačiu metu bandymo juostelės kaina kai kuriais atvejais yra 10 kartų didesnė nei analizės kaina.

Imunocheminiai analizės metodai, pagrįsti specifiniu analitės surišimu su atitinkamais antikūnais, tapo plačiai naudojami analizės praktikoje ir yra naudojami įvairiose medicinos srityse. Susidariusio „antigeno-antikūno“ komplekso indikacija gali būti atlikta, jei į vieną iš pradinių reakcijos sistemos komponentų įvedama etiketė, kuri lengvai aptinkama atitinkamu labai jautriu fizikiniu ir cheminiu metodu. Šiam tikslui patogios pasirodė izotopinės, fermentinės, fluorescencinės, paramagnetinės ir kitos etiketės, kurių naudojimas leido milijonus kartų padidinti klasikinių imunocheminių analizės metodų jautrumą. Imunocheminiai analizės metodai gali būti taikomi diagnozuojant širdies ir kraujagyslių, endokrininės ir kitų sistemų ligas, nustatant nevaisingumo priežastis, vaisiaus vystymosi sutrikimus, onkologijoje - nustatyti naviko žymenis ir stebėti gydymo efektyvumą, nustatyti koncentraciją. imunoglobulinų, fermentų ir vaistinių medžiagų kiekis kraujyje. Kai kuriais atvejais tyrimai atliekami funkcinių apkrovos tyrimų fone (pavyzdžiui, insulino kiekio kraujo serume nustatymas gliukozės tolerancijos testo fone) arba dinamikos (pavyzdžiui, lytinių hormonų kiekio kraujyje nustatymas menstruacinis ciklas).

ELISA metodas
Fermentinis imunologinis tyrimas – tai imunocheminės analizės rūšis, pagrįsta labai specifine imunologine antigeno reakcija su atitinkamu antikūnu, kad susidarytų imuninis kompleksas, kurio aptikimui kaip etiketė naudojamas fermentas arba nuo fermento priklausoma medžiaga.

METODO PRINCIPAS
Fermentinio imunologinio tyrimo metodas pagrįstas antigeno imuninės reakcijos su antikūnu rezultatų įvertinimu.

Gautas kompleksas nustatomas taip: į reakcijos mišinį įvedamas konjugatas, kuriame yra fermento etiketė, taip pat pridedamas specialus chromogeninis substratas. Fermentas, sąveikaudamas su substratu, keičia jo spalvą. Rezultatai registruojami fotometriškai.

TYRIMO SISTEMŲ CHARAKTERISTIKOS IR TIKSLAS
Šiuolaikinėje laboratorijoje fermentų imunologiniai tyrimai atliekami naudojant komercines bandymų sistemas. Pagrindinės testų charakteristikos yra jautrumas ir specifiškumas. Jautrumas reiškia teigiamų mėginių procentą, kurį tyrimo sistema aptiko iš teigiamų mėginių masyvo, kai buvo patvirtinti visi rezultatai, pavyzdžiui, teigiamų kontrolinių serumų serokonversijos skydeliai. Taigi, testavimo sistemos jautrumas yra klaidingai neigiamo rezultato tikimybės rodiklis. Klaidingai neigiamas rezultatas- neigiamas rezultatas, gautas naudojant šią bandymų sistemą mėginiui, kuris iš tikrųjų yra teigiamas.

Specifiškumas reiškia aptiktų neigiamų mėginių procentą iš neigiamų kontrolinių serumų grupės. Taigi testavimo sistemos specifika yra pasireiškimo tikimybės rodiklis klaidingai teigiamas rezultatas, T.

e. teigiamas rezultatas tam tikroje bandymų sistemoje, gautas iš mėginio, kuris iš tikrųjų yra neigiamas.

Be tyrimų sistemų suskirstymo pagal tiriamą rodiklį (infekcinė diagnostika, endokrininės sistemos tyrimai, naviko žymenų nustatymas ir kt.), tyrimai skirstomi į grupes pagal jų paskirtį.

Taigi, pavyzdžiui, diagnozuojant infekcines ligas, testų sistemos skirstomos į:
atrankai, skirta identifikuoti užsikrėtusiems žmonėms pirminio tyrimo metu;
diagnostinė, naudojama tiriant pacientus, kuriems įtariama ar turi specifinę infekciją;
patvirtinantis, naudojamas kaip papildomas gavus teigiamus patikros rezultatus arba diagnostinis testas;
stebėjimo testai (terapijos efektyvumo įvertinimas).

IŠANALITINIS ETAPAS
Neteisingas šių procedūrų atlikimas yra vienas pagrindinių (iki 20%) klaidų ikianalizės etape šaltinių, todėl instrukcijoje personalui kraujo ir kitų mėginių paėmimo tvarka turėtų būti išsamiai aprašyta, įskaitant mėginio identifikavimą, detalų aprašymą. technologija ir biologinė sauga.

Patogu paciento paruošimo sąlygas atspindėti atmintinėje analizės kryptimi, kur reikia nurodyti klaidas ir rekomendacijas imant veninį kraują - pagrindinę ELISA tyrimų medžiagą.

Preanalitinio etapo kokybės instrukcijose būtina aiškiai išdėstyti biologinės medžiagos paėmimo tyrimams sąlygas. Reikia turėti omenyje, kad tyrimo rezultatams įtakos turi biologinių veiksnių visuma, apibūdinanti organizmo būklę.

Nėštumas
Rezultatų interpretavimas laboratoriniai tyrimai nėščioms moterims mėginio ėmimo metu būtina atsižvelgti į nėštumo amžių. Fiziologinio nėštumo metu vidutinis plazmos tūris padidėja nuo maždaug 2600 iki 3900 ml, o per pirmąsias 10 savaičių padidėjimas gali būti nežymus, o vėliau iki 35-osios savaitės, kai pasiekiamas nurodytas lygis, didėja tūris.

Trečiąjį trimestrą šlapimo kiekis taip pat gali fiziologiškai padidėti iki 25%. Paskutinį trimestrą fiziologinis glomerulų filtracijos greitis padidėja 50%. Gerai žinomus su nėštumu susijusius lytinių hormonų gamybos ir koncentracijos plazmoje pokyčius lydi įvairių analičių, tokių kaip skydliaukės hormonai, pokyčiai.

Dienos svyravimų įtaka
Kai kurie komponentai kasdien svyruoja. Taigi kortizolio kiekis padidėja dieną, o sumažėja naktį. Cirkadinis ritmas gali keistis veikiamas individualių ritmų – maisto, miego, fizinio aktyvumo. Šios įtakos nereikėtų painioti su tikrais cirkadiniais svyravimais.

Menstruacinio ciklo fazės įtaka
Statistiškai reikšmingus koncentracijos pokyčius gali sukelti svyravimai hormoninis fonas menstruacijų metu. Taigi nustatoma, kad aldosterono koncentracija plazmoje prieš ovuliaciją yra dvigubai didesnė nei folikulų fazėje. Panašiai renino kiekis gali padidėti prieš ovuliaciją.

Vaistų vartojimas
Rengiant dalykus biocheminiams tyrimams buvo taikomi šie metodai:
vaistai, trukdantys nustatyti komponentus, neįtraukiami prieš vartojant biomedžiagą, jei jie nėra skiriami dėl sveikatos priežasčių;
ryto vaistai atliekami tik paėmus biomedžiagą;
kraujo mėginių ėmimas diagnostikos tikslais atliekamas prieš vaistų ir tirpalų infuziją.

Laboratorinių mėginių užteršimas infuziniais tirpalais yra labiausiai paplitusi ir dažniausiai sutinkama ikianalitinių trukdžių forma ligoninėse. Rekomenduojama informuoti laboratoriją, kada ir kokia infuzija pacientui buvo skirta ir kada paimtas kraujo mėginys. Kraujo mėginio niekada negalima imti iš kraujagyslės, esančios arti infuzijos vietos. Mėginius reikia paimti iš kitos rankos venos, kuri nebuvo suleista.

Dieta
Po valgio atskirų medžiagų apykaitos produktų kiekis kraujyje gali padidėti arba pasikeisti dėl po absorbcijos. hormoninis poveikis. Kitų analičių nustatymas gali būti sudėtingas dėl chilomikronemijos sukelto drumstumo kraujo mėginiuose po valgio. Siekiant atmesti šių veiksnių įtaką, prieš imant mėginius laboratoriniams tyrimams, rekomenduojama laikytis 8-12 valandų badavimo laikotarpio.

Psichinis stresas ir fizinis aktyvumas
Psichinio streso (kraujo paėmimo baimė, priešoperacinis stresas ir kt.) įtakos laboratoriniams rezultatams laipsnis dažnai neįvertinamas. Tuo tarpu jam veikiant gali padidėti hormonų (aldosterono, angiotenzino, katecholaminų, kortizolio, prolaktino, renino, somatotropino, vazopresino) sekrecija, taip pat padidėti kiti rodikliai (albuminas, fibrinogenas, gliukozė, insulinas). , laktatas ir cholesterolis). Didelę įtaką rezultatams turi tiriamojo fizinio aktyvumo būklė. Ilgai laikantis griežto lovos režimo ir ribojant fizinį aktyvumą, su šlapimu padidėja noradrenalino, kalcio, chloro, fosfatų, amoniako išsiskyrimas, padidėja šarminės fosfatazės aktyvumas kraujo serume. Taigi, norint atlikti objektyvią laboratorinę analizę, prieš imant klinikinę medžiagą būtina pasiekti paciento paruošimo standartizavimą.

MĖGINIŲ RINKIMAS IŠ PACIENTO
Rekomendacijos dėl kraujo ir kitų skystųjų bioproduktų paėmimo laboratoriniams tyrimams fermentų imunologiniu tyrimu sąlygų yra šios.
1. Jei įmanoma, mėginius reikia imti nuo 7 iki 9 val.
2. Mėginius reikia paimti praėjus 8-12 valandų po paskutinio valgio.
3. Mėginius reikia paimti prieš atliekant bet kokias diagnostines ar gydomąsias procedūras, kurios gali turėti įtakos tyrimo rezultatams.
4. Vaisto stebėjimo atveju reikia atsižvelgti į didžiausią koncentraciją po vaisto vartojimo ir pusiausvyrinės apykaitos fazę prieš kitą vaisto dozę.
5. Alkoholio abstinencijos laikotarpis turi būti bent 24 valandos prieš vartojant biofluidą.
6. Kraujas tiriant medžiagas, kurių koncentracija kraujyje kinta cikliškai, turi būti paimama griežtai laikantis fiziologinių ciklų. Pavyzdžiui, folikulus stimuliuojančio hormono ir liuteinizuojančio hormono lygio įvertinimas yra susietas su menstruacinio ciklo diena.
7. Kad būtų pašalinta kūno padėties pasikeitimo įtaka, tiriamasis turi būti ramybėje, sėdėti arba gulėti bent 5 minutes.
8. Dinaminio paciento stebėjimo metu medžiaga turi būti paimama identiškoje kūno padėtyje.
9. Kraujagyslių (venų) suspaudimas uždedant žnyplę (manžetę) imant kraują turi būti minimalus ir neviršyti 1 minutės.
10. Visada švęskite tikslus laikas mėginių ėmimas atitinkamuose dokumentuose.

MĖGINIŲ VEŽIMAS. LAIKO IR TEMPERATŪROS POVEIKIS
Gautas kraujas turi būti laiku pristatytas į laboratoriją. Remiantis beveik visų įmonių – fermentų imuninių tyrimų sistemų gamintojų rekomendacijomis, serumą iš jo būtina paimti ne vėliau kaip per 1 valandą po kraujo paėmimo.

Rekomendacijos dėl imunologiniams tyrimams skirtos biologinės medžiagos laikymo ir transportavimo sąlygų yra šios.
1. Greitas transportavimas ir trumpalaikis saugojimas pagerina laboratorinių rezultatų patikimumą. Reikėtų vengti viso kraujo saugojimo. Kraujo mėginiai turi būti pristatyti į laboratoriją per 45 minutes nuo kraujo paėmimo, kad centrifugavimas ir mėginių atskyrimas būtų užbaigti per 1 valandą.
2. Mėginiai ir mėginiai išsaugomi kuo geriau, tuo žemesnė jų laikymo temperatūra.
3. Mėginiai ir mėginiai visada turi būti laikomi uždarose talpyklose (garinimas!). Garavimas/sublimacija lemia pastebimą visų nelakių komponentų koncentracijos/aktyvumo padidėjimą. Tai ypač ryšku, kai mėginio tūris yra palyginti mažas, o paviršiaus plotas yra santykinai didelis. Taip pat kyla išgaravimo pavojus šaldytuvuose (drėgmės kondensacija ant aušinimo elementų).
4. Laikymo problemos sumažinamos naudojant vienkartines mėginių surinkimo sistemas.
5. Atskyrimo elementai (pvz., atskyrimo geliai) pagerina serumo/plazmos išeigą ir leidžia serumui likti pirminiuose mėgintuvėliuose virš krešulio.
6. Nekratykite mėginių indų (pneumatinių vamzdelių tiekimo sistemos!): Padidėja hemolizės rizika.
7. Kraujagysles visada laikykite vertikalioje padėtyje. Venkite šviesos poveikio.
8. Pažymėkite užkrėstą medžiagą ir su ja elkitės ypač atsargiai.

STANDARTINIS PILNAS ELISA RINKINYS
ELISA rinkinyje, kaip taisyklė, yra visi reagentai, reikalingi analizei, paprastai 96 nustatymui. Į rinkinį paprastai įeina šie reagentai.
Standartai (jei tai yra kiekybinio fermento imunologinio tyrimo rinkinys), turi būti nustatyti 5-7 tirpalai su skirtingomis analitės koncentracijomis.
Konjugatas (paruoštas tirpalas arba koncentratas), kuriame yra antikūnų arba fermentu pažymėto antigeno.
96 šulinėlių imunosorbentinė mikroplokštelė supakuota į aliuminio foliją su sausikliu.
Skalbimo buferio koncentratas.
Substratas-chromogeninis reagentas – monoreagentas arba susidedantis iš dviejų komponentų: tirpalo A, kurio buferyje paprastai yra tetrametilbenzidino, ir tirpalo B – vandenilio peroksido buferyje.
Stop tirpalas, dažniausiai druskos rūgšties tirpalas.
Kontrolinis serumas (vienas ar daugiau). Kai kuriuose reagentų rinkiniuose nėra kontrolinių serumų, todėl juos reikia užsisakyti atskirai. Rinkinyje papildomai gali būti reagentų, skirtų mėginio skiedimui, konjugatui, substratui, etalonui.

KIETOS FAZĖS FERMENTO IMUNINĖS TYRIMAS MIKROPLOKŠTELĖMIS
Tyrimo objektas fermentų imunologinio tyrimo formatu gali būti ir antigenai, ir antikūnai. Antigenų nustatymo fermentų imunologinio tyrimo schemose pastarasis gali būti infekcinio sukėlėjo antigenas, reguliuojantis baltymas arba hormonas, naviko žymuo arba kitas imunogeninį aktyvumą turintis junginys, kuris turi būti nustatytas mėginyje. Yra daug fermentinio imunologinio tyrimo metodo modifikacijų, tačiau plačiausiai naudojamas heterogeninis (kietos fazės) susietas imunosorbentas tyrimas mikroplokštelės formatu. Kaip kieta fazė, naudojamas polistireno mikroplokštelės šulinių paviršius, ant kurių adsorbuojami žinomi antigenai arba antikūnai, įtraukti į tyrimo sistemą. Antigenas arba antikūnas, imobilizuotas ant kieto nešiklio paviršiaus, vadinamas imunosorbentu. Vykstant labai specifinei imunosorbento reakcijai su tiriamajame mėginyje nustatytais antikūnais ar antigenais, susidaro imuniniai kompleksai, kurie taip pat fiksuojami ant kietosios fazės. Reakcijoje nedalyvaujančios medžiagos ir perteklinis reagentų kiekis pašalinami pakartotinai plaunant. Ši schema leidžia supaprastinti reakcijos komponentų atskyrimo procesą.

Šiuo metu plačiai paplitusios testavimo sistemos, kuriose naudojami streptavidinas ir biotinilinti monokloniniai antikūnai. Tokiu atveju į streptavidinu padengtus mikrošulinėlius pirmiausia dedama etalonų, kontrolinių medžiagų ir pacientų mėginių. Streptavidinas atitolina reakciją nuo plokštelės paviršiaus, sukurdamas „antigeno-antikūno“ sąveikos efektą tūryje, o ne paviršiuje, taip padidindamas diagnostinės sistemos jautrumą. Tada pridedami biotinilinti antikūnai (labai išgrynintų specifinių monokloninių antikūnų prieš įvairius epitopus mišinys), fermentais pažymėti antikūnai (konjugatas), sumaišomi reagentai. Dėl reakcijos tarp įvairių antikūnų ir nustatomo antigeno susidaro „sumuštinis“ kompleksas, kuris ląstelėse jungiasi su streptavidinu. Neprisirišę komponentai pašalinami plaunant. Inkubavus su substrato tirpalu ir sustabdžius reakciją, fotometriškai nustatomas tirpalų optinis tankis duobutėse. Bandymų sistemos, kuriose naudojami streptavidinas ir biotinilinti monokloniniai antikūnai, yra antros kartos testai, kurių jautrumas yra didesnis.

KOKYBINĖS ANALIZĖS SAVYBĖS
Kokybinė analizė dažnai naudojama atrankos tyrimuose ir infekcinių ligų diagnostikai.

Paprastai infekcijoms diagnozuoti naudojamos dviejų tipų serologinės reakcijos:
patogenui specifinių antikūnų nustatymas tiriamojo kraujo serume;
mikroorganizmo ar viruso genties ir rūšies nustatymas.

Šiuo atveju nežinomas reakcijos komponentas yra antigenas. Tokiam tyrimui reikalinga reakcija su žinomais imuniniais serumais. Kokybinės analizės testavimo sistemose tyrimo rezultatas nustatomas lyginant jo optinį tankį su apskaičiuota kritinio optinio tankio reikšme. Optiniam tankiui apibūdinti gali būti naudojami kiti terminai, tokie kaip „riba“ arba „slenkstinis optinis tankis“. Optinio tankio apskaičiavimo formulė nurodyta bandymo sistemos instrukcijose. Skaičiuojant ribą, gali būti tiek vidutinės teigiamų ir neigiamų kontrolinių bandinių optinio tankio vertės, tiek specialaus kontrolinio mėginio - pjūvio lygio kontrolės - optinis tankis. Jei mėginio optinis tankis yra didesnis nei ribinė vertė, laikoma, kad mėginys turi teigiamą specifinių antikūnų atžvilgiu.

Labai dažnai atliekant skaičiavimus reikia atsižvelgti į pilkąją zoną. Pilka zona yra specifinių antikūnų koncentracijų diapazonas, kuriame vienodai tikėtina, kad tiek teigiami, tiek neigiami mėginiai pateks. Pilkos zonos riba nurodyta bandymo sistemos instrukcijose, paprastai tai yra 10% slenkstinės vertės. Analizės, kuri pateko į pilkąją zoną, rezultatų negalima vienareikšmiškai interpretuoti, norint patikslinti rezultatą, reikia pakartoti tyrimą su nauju serumu, gautu po 1-2 savaičių.

Norint stebėti gydymo efektyvumą, svarbu naudoti testavimo sistemas, kurios leidžia gauti rezultatus pusiau kiekybiniu arba kiekybiniu būdu. Taikant pusiau kiekybinį metodo variantą, apskaičiuojamas vidutinio mėginio optinio tankio ir ribinės ribos optinio tankio santykis.

Mėginiai laikomi:
teigiamas, jei santykis didesnis nei 1,1;
abejotina, ar ±10 % ribą,
neigiamas, jei santykis yra mažesnis nei 0,9.

Radioimuninis tyrimas
Radioimuninis tyrimas – tai biologiškai aktyvių medžiagų (hormonų, fermentų, Vaistai ir kt.) biologiniuose skysčiuose, remiantis konkurenciniu norimų stabilių ir panašių medžiagų, paženklintų radionuklidu su specifinėmis surišimo sistemomis, surišimu. Pastarieji dažniausiai yra specifiniai antikūnai. Dėl to, kad pažymėtas antigenas pridedamas tam tikru kiekiu, galima nustatyti medžiagos dalį, kuri prisijungė prie antikūnų, ir dalį, kuri lieka nesurišta dėl konkurencijos su nežymėtu antigenu, kuris yra tiriamas. aptikta. Antikūnams arba antigenams žymėti dažniausiai naudojamas jodo izotopas 1251, kurio pusinės eliminacijos laikas yra 60 dienų ir didelis specifinis radioaktyvumas. Radioimuniniam tyrimui yra gaminami standartiniai reagentų rinkiniai, kurių kiekvienas yra skirtas bet kurios medžiagos koncentracijai nustatyti. Tyrimas atliekamas keliais etapais: biologinė medžiaga sumaišoma su reagentais, mišinys inkubuojamas kelias valandas, atskiriama laisva ir surišta radioaktyvioji medžiaga, atliekama mėginių radiometrija, apskaičiuojami rezultatai. Radioimuninis tyrimas turi didelį jautrumą ir specifiškumą. Metodo trūkumas yra apribojimai, nulemti veikimo su radioaktyviosiomis medžiagomis režimo, ir gana trumpas diagnostikos rinkinio galiojimo laikas, susijęs su radioaktyviosios etiketės irimu.

Imunofluorescencinės reakcijos populiarumą lemia jos ekonomiškumas, platus diagnostikos rinkinių pasirinkimas ir atsako gavimo greitis. Šiuo metu šioje reakcijoje naudojami ir polikloniniai serumai, ir monokloniniai antikūnai, pažymėti fluoresceino izotiocianatu. Siekiant sumažinti nespecifinę fono liuminescenciją, tepinėlis naudojamas galvijų serumo albuminu, pažymėtu rodaminu arba Evanso mėlyna spalva.

Į reakcijos rezultatus atsižvelgiama naudojant liuminescencinį mikroskopą, kurio optinėje sistemoje yra sumontuotas šviesos filtrų rinkinys, užtikrinantis preparato apšvietimą ultravioletine arba mėlynai violetine šviesa, kurios bangos ilgis yra. Dėl to fluorochromas šviečia tam tikrame spektro diapazone. Tyrėjas įvertina švytėjimo pobūdį, objektų formą, dydį ir jų santykinę padėtį.
Plačiausiai naudojami rinkiniai yra pagrįsti tiesiogine imunofluorescencine reakcija, tačiau yra testavimo sistemų, kuriose naudojama netiesioginė imunofluorescencinė reakcija.

Jei tiesioginė imunofluorescencinė reakcija gali būti naudojama tik antigenui nustatyti, tai netiesioginė šios reakcijos versija gali būti naudojama tiek antigenų nustatymui, tiek serodiagnostikai (pavyzdžiui, sergant Laimo liga, sifiliu). Šiuo atveju tepinėliai ruošiami iš etaloninės patogeno padermės. Tiriamasis serumas užtepamas ant tepinėlio. Jei jame yra norimų antikūnų, jie jungiasi su mikrobų ląstelių antigenais. Preparatą plaunant buferiniu tirpalu pašalinami neprisirišę antikūnai. Tada vaistas apdorojamas žymėtu serumu prieš žmogaus imunoglobulinus. Esant teigiamam reakcijos rezultatui, atliekant tepinėlio mikroskopiją fluorescenciniu mikroskopu, stebimas specifinis etaloninės kultūros švytėjimas.

Pagrindinis imunofluorescencinės reakcijos trūkumas yra jos subjektyvumas. klasikiniai kriterijaiŠios reakcijos ypatumai yra šie:
būdinga patogeno morfologija, dydis ir vieta tepinėlyje;
periferinis objekto švytėjimo pobūdis;
fluorescencinė spalva;
fluorescencijos intensyvumas.

Tiriant didelius objektus (Trichomonas, gardnerella, virusų paveiktas ląsteles), šie kriterijai leidžia gauti labai patikimą rezultatą. Tuo pačiu metu elementarių chlamidijų ir mikoplazmų kūnų dydis yra ties liuminescencinio mikroskopo skiriamosios gebos riba. Tuo pačiu metu sunku įvertinti mikroorganizmų morfologiją, o liuminescencija praranda periferinį pobūdį. Likę kriterijai yra aiškiai nepakankami, kad būtų galima patikimai identifikuoti pastebėtą mikroorganizmą. Atsižvelgiant į tai, kas išdėstyta, subjektyvus atsižvelgimo į reakciją pobūdis kelia specialius reikalavimus tyrimą atliekančio personalo kvalifikacijai.

Šiuolaikinėje medicinos praktikoje vaidmuo laboratorinė diagnostika kaip pagrindinė diagnostikos ir gydymo stebėjimo priemonė. Vienas iš sparčiai besivystančių ir populiarių laboratorinės diagnostikos metodų yra imunochromatografinė analizė.

IMUNOCHROMATOGRAFINĖ ANALIZĖ (ICA) – tai tam tikrų medžiagų koncentracijų nustatymo biologinėse medžiagose (šlapime, visame kraujyje, serume ar plazmoje, seilėse, išmatose ir kt.) metodas. Šio tipo analizė atliekama naudojant indikatoriaus juosteles, lazdeles, plokštes ar testavimo kasetes, kurios užtikrina tyrimo greitį.IHA yra gana jaunas analizės metodas, literatūroje dažnai įvardijamas kaip sausosios imunochemijos metodas, juostelė. testas, QuikStrip kasetė, QuikStrip matuoklis, greitasis testas arba greitoji analizė. Šie pavadinimai siejami su šio analizės metodo sparta.

Imunologinis analizės metodas pagrįstas reakcija tarp antigeno ir jį atitinkančio antikūno. Antigenas yra svetima žmogaus organizmui medžiaga, kuri gali sukelti imuninę sistemą (gynybos reakciją). Antikūnai yra baltymai, kuriuos išskiria mūsų kūno ląstelės, kai į jį patenka antigenas. Imuninės chromatografijos metodas pagrįstas ypatinga antikūnų savybe specifiniu (tai yra selektyviu) būdu prisijungti prie antigeno. Tai reiškia, kad kiekvienas antikūnas atpažįsta ir jungiasi tik prie konkretaus antigeno. Visi imunologiniai analizės metodai, įskaitant ICA, yra pagrįsti šia unikalia antikūnų savybe. Be to, šiuo analizės metodu nustatytas „antigenas“ taip pat gali būti biomedžiagoje nustatytas antikūnas prieš infekcinį agentą arba autoantikūnas, tada likę tyrime naudojami antikūnai bus antikūnai. ICA tyrimuose naudojami trijų tipų antikūnai.

Tirpūs monokloniniai antikūnai prieš tiriamą antigeną arba antikūną, konjuguoti ("susiejimai") su koloidiniu auksu – dažais, kuriuos galima lengvai atpažinti net ir esant mažiausioms koncentracijoms. Šie antikūnai dedami šalia tos vietos, kur tyrimo juostelė panardinta į fiziologinį skystį (šlapimą, kraują).
Polikloniniai antikūnai prieš tiriamą antigeną arba antikūną, standžiai imobilizuoti juostelės tyrimo zonoje.
Antriniai antikūnai prieš monokloninius antikūnus, tvirtai imobilizuoti tyrimo juostelės kontrolinėje zonoje.

Narkotikų testų veikimo principas kiek skiriasi nuo kitų testavimo sistemų. ICA juostelės įtaisas skiriasi tuo, kad bandymo zonoje yra imobilizuoti dirbtiniai antigenai, galintys specifiškai prisijungti prie laisvųjų antikūnų. Jei tiriamojo antigeno (vaisto) fiziologiniame skystyje NĖRA, antikūnų surišimo vietos (epitopai) lieka laisvos, jos gali prisijungti prie dirbtinių antigenų tiriamojoje zonoje, dėl konjuguoto dažiklio suformuodamos tamsią juostą. Atitinkamai, jei tiriamojo antigeno yra skystyje, antikūnai, su juo kontaktavę, nebegali sąveikauti su tiriamojoje zonoje esančiais antigenais ir ten nesusidaro tamsi juosta. Tačiau abiem atvejais (jei analizė atlikta teisingai) „nudažyti“ antikūnai prisijungia prie antrinių antikūnų kontrolinėje zonoje ir sudaro tamsią juostelę. Galimi variantai analizės metu: viena juosta – teigiamas rezultatas, dvi juostos – neigiamas rezultatas, juostų nėra – analizė atlikta neteisingai.

Pagrindiniai imunochromatografinių bandymo juostelių naudojimo pranašumai yra šie:

1. Paprastumas ir patogumas - leidžia gauti rezultatą (analizę ir pradinę ligos priežasties idėją) be įrangos ir specialių įgūdžių
2. Patikimumas - testų patikimumas siekia 92-99,8%, o kiekviename teste yra įmontuota vidinė kontrolė
3. Pelningumas – minimalios išlaidos testo įsigijimui ir laiko sutaupymas apklausai. Mažmeninėje prekyboje vieno ELISA tyrimo kaina yra 5-10 kartų brangesnė nei ICA, o rezultatas gaunamas bent jau kitą dieną
4. Anonimiškumas – tai ypač svarbu nustatant lytiniu keliu plintančias ligas, kitas infekcines ligas, taip pat nustatant narkotikų vartojimo faktus
5. Nepriklausomybė – nereikia išankstinės medicininės konsultacijos ar recepto

Greitieji testai, būdami efektyvia diagnostikos priemone, leidžia vizualiai nustatyti ir įvertinti antigenų, antikūnų, hormonų ir kitų diagnostiškai svarbių medžiagų kiekį žmogaus organizme per kelias minutes. Greitieji tyrimai išsiskiria dideliu jautrumu ir tikslumu, nustato daugiau nei 100 ligų rūšių, tarp jų ir tokias įprastas ligas kaip tuberkuliozė, sifilis, chlamidijos, įvairių tipų virusinis hepatitas ir kt., taip pat visas vartojamų vaistų spektras. su dideliu aptikimo patikimumu. Svarbus šio tipo tyrimų privalumas – jų naudojimas in vitro diagnostikoje, kuriai nereikia tiesioginio tiriamo paciento buvimo.

Bibliografija.

Wennig R, Moeller MR, Haguenoer JM ir kt. (1998) Imunochromatografinių greitųjų testų, skirtų kanabinoidų, kokaino ir opiatų atrankai šlapime, kūrimas ir įvertinimas // J. Anal. Toksikolis. — V.22 — P.148-155
Coons, S.J. Pažvelkite į namų nėštumo testų rinkinių pirkimą ir naudojimą. Am Pharm. NS29:46-48, 1989.
Bastianas, L. A., Nanda, K., Hasselblad, V. ir Simel, D. L. Namų nėštumo testų rinkinių diagnostinis efektyvumas. Metaanalizė. Arch.Fam.Med. 7:465-469, 1998.
Latmanas, N.S. ir Bruot, B.C. Namų nėštumo testų rinkinių įvertinimas. Biomed.Instrum.Technol. 23:144-149, 1989.
Hicks, J.M. ir Iosefsohn, M. Namų nėštumo testų rinkinių patikimumas neprofesionalų rankose. N.Engl.J.Med. 320:320-321, 1989.
Torlesse, H., Wurie, I. M. ir Hodges, M. Imunochromatografijos testo kortelių naudojimas diagnozuojant hepatito B paviršiaus antigeną nėščioms moterims Vakarų Afrikoje. Br.J.Biomed.Sci. 54:256-259, 1997.
Sato, K., Ichiyama, S., Iinuma, Y., Nada, T., Shimokata, K. ir Nakashima, N. Imunochromatografinių tyrimų sistemų, skirtų greitam hepatito B paviršiaus antigeno ir antikūnų, Dainascreen HBsAg ir Dainascreen aptikimui, įvertinimas ausab. J. Clin. Microbiol. 34:1420-1422, 1996 m.
Lein, M., Jung, K., Schnorr, D., Henke, W., Brux, B. ir Loening, S.A. Greitas PSA patikrinimas: imunocheminės membranos juostelės testo įvertinimas. Clin.Chem. 41:1545-1547, 1995.
Anderson, J.C., Cheng, E., Roeske, M., Marchildon, P., Peacock, J. ir Shaw, R.D. Serumo antikūnų prieš Helicobacter pylori nustatymas imunochromatografiniu metodu. Am. J. Gastroenterolis. 92:1135-1139, 1997.
Schrier, W. H., Schoengold, R. J., Baker, J. T., Norell, J. L., Jaseph, C. L., Okin, Y., Doe, J. Y. ir Chandler, H. FlexSure HP kūrimas – imunochromatografinis metodas antikūnams prieš Helicobacter pylori aptikti. Clin.Chem. 44:293-298, 1998.
Cognein, P., Costa, A. ir Giacosa, A. Helicobacter pylori serodiagnosis: greito, miniatiūrinio imunochromatografinio testo įvertinimas. Eur.J.Vėžys.Ankst. 3:457-463, 1994.
Shirin, H., Bruck, R., Kenet, G., Krepel, Z., Wardi, Y., Reif, S., Zaidel, L., Geva, D., Avni, Y. ir Halpern, Z. Naujo imunochromatografinio tyrimo, skirto Helicobacter pylori IgG antikūnams nustatyti senyviems simptominiams pacientams, įvertinimas. J. Gastroenterolis. 34:7-10, 1999.
Kagen, L. J. 1973 Mioglobinas: Biocheminiai, fiziologiniai ir klinikiniai aspektai. Niujorko ir Londono Kolumbijos universiteto leidykla.
Drexel, H. ir kt. 1983 Mioglobinemija ankstyvoje ūminio miokardo infarkto diagnozėje. Esu. Heart J. 105: 642-651.
McComb, J. M. ir kt. 1983 Mioglobinas labai ankstyvoje ūminio miokardo infarkto fazėje. Annos klinika. Biochem, 22:152-155.
Grenardier, E., Keidar, S., Kahana, L., Alpan, G., Marmur, A., Palant, A. 1983 Serumo mioklobino, bendrojo CPK ir CK-MB izofermento vaidmuo ūminėje miokardo fazėje infarktas. Esu. Heart J. 105:408-416.
Ellis A.K., Saran, B.R. 1989 Mioolobino išsiskyrimo kinetika ir miokardo mioglobino sumažėjimo prognozė po vainikinių arterijų reperfuzijos. Tiražas 80: 676-682.
McComb, J.M. ir kt. 1984 Mioglobinas ir kreatino kinazė sergant ūminiu miokardo infarktu. Br. Heart J. 51:189-194.
Struyf, F., Lemmens, A., Valadas, E., Verhaegen, J., and Van Ranst, M. Imunochromatografinio antikūnų prieš Mycobacterium tuberculosis aptikimo, kaip papildomo dažymo auraminu, naudingumas greitai diagnozuojant tuberkuliozę sergant mažu paplitimo nustatymas. Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 18:740-742, 1999.
Abe, C., Hirano, K. ir Tomiyama, T. Paprastas ir greitas Mycobacterium tuberculosis komplekso identifikavimas imunochromatografiniu tyrimu, naudojant anti-MPB64 monokloninius antikūnus. J. Clin. Microbiol. 37:3693-3697, 1999.
Edmundas C. Tramontas. Traponema pallidum (sifilis). Mandell, Douglas ir Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases. G. L. Mandell, J. E. Bennett, P. Dolin, red. Churchill Livingston, Niujorkas, 1995 m.
Steven J. Norris ir Sandra Alarsen, Traponema ir kitos su šeimininku susijusios spirochemetos klinikinės mikrobiologijos vadove. P. Murray, E.J. Baronas, M.A. Pfalleris, FC Tenoveris, R.H. Yoken, red., ASM Press, Vašingtonas, D.C. 1995 metai.
Larsenas, S.A., E.F. Hunter ir S.J. Drausas (red.) 1990. Sifilio tyrimų vadovas, 8-asis leidimas. Amerikos visuomenės sveikatos asociacija, Vašingtonas D.C.

Veikimo principas toks, kad kai bandymo juostelė panardinama į biologinį skystį (ar kitą skysčio mėginį), ji pradeda migruoti palei juostelę plonasluoksnės chromatografijos principu. Kartu su juo juda ant bandymo juostelės dugno užtepti pažymėti specifiniai antikūnai, kurie afinitetu jungiasi prie analitės.

Yra 2 ICA formatai: tiesioginis ir konkurencinis metodas.

Schemoje tiesioginis(sumuštinis) IHA ant konjugato membranos naudojamas konjugatas su antikūnais. Šiai analitei specifiniai antikūnai yra imobilizuojami ant tyrimo linijos, o anti-rūšiniai antikūnai, būdingi pirminiams antikūnams, imobilizuojami ant kontrolinės linijos. Kai naudojamas mėginys, kuriame yra analitės, kai mėginys su konjugatu patenka į membraną, analitė prisijungia prie At-tag konjugato. Tada imuninis kompleksas patenka į tyrimo zoną, kur prisijungia prie specifinių antikūnų, sudarydamas Ab-Ag-Ab etiketės „sumuštinį“. Nesurišto konjugato perteklius jungiasi prie anti-rūšinių antikūnų kontrolinėje linijoje. Taigi, 2 eilučių aptikimas ant bandymo juostelės yra teigiamas tyrimo rezultatas. Jei mėginyje nėra analitės, konjugatas jungiasi su anti-rūšiniais antikūnais tik ant kontrolinės linijos, sudarydamas vieną liniją ant tyrimo juostelės. Tiesioginis ICA metodas naudojamas aptikti stambiamolekulinius junginius – virusus, įsk. ŽIV; įvairūs hormonai (pavyzdžiui, nėštumo testuose), infekcinių ligų sukėlėjai.
Metodas konkurencingas IHA, naudojamas mažos molekulinės masės junginiams nustatyti, yra pagrįstas analitės ir imobilizuoto analitės: baltymo nešiklio konjugato konkurencija dėl riboto skaičiaus specifinių antikūnų surišimo vietų, esančių At-tag konjugate. Kai naudojamas mėginys, kuriame yra analitės, jis prisijungia prie At-tag konjugato ant membranos su konjugatu. Tada imunokompleksas praeina per bandymo zoną, kur imobilizuojamas analitės: nešiklio baltymo konjugatas. Imunokompleksas negali prisijungti prie šio konjugato dėl sterinių kliūčių: mažos molekulinės masės junginiai paprastai turi vieną antigeninį determinantą ir atitinkamai antikūnai turi vieną surišimo vietą antigenui, kuris jau yra užimta analitė. Tada imuninį kompleksą suriša anti-rūšiniai antikūnai, esantys kontrolinėje linijoje. Dėl to spalvotos juostos nebuvimas bandymo zonoje ir spalvos buvimas kontrolinėje zonoje rodo, kad analitės koncentracija tiriamajame mėginyje viršija slenkstinę šio tyrimo vertę.

Konkurencinis ICA formatas naudojamas mažos molekulinės masės junginiams, įskaitant narkotinių junginių metabolitus šlapime, burnos skystyje ir audinių ekstraktuose, aptikti.

Taip pat yra instrumentiniai pusiau kiekybiniai ir kiekybiniai ICA formatai, kuriuose naudojami specialūs skaitytuvai, fiksuojantys etiketės intensyvumą tyrimo juostelės tyrimo zonoje.