Rh antikūnų neaptikta. Antikūnų titrų nustatymo fermentų imunologiniu metodu diagnozuojant virusines infekcijas

Išradimas yra susijęs su medicina, ypač su klinikine virusologija, ir gali būti naudojamas tikslesniam ELISA rezultato įvertinimui nustatant antikūnus prieš virusus, taip pat gydymo efektyvumui stebėti. Metodo esmė slypi tame, kad norint tiksliau įvertinti ELISA rezultatą, kai nustatomi antikūnai prieš patogenus virusinės infekcijos atitinkami peroksidaze pažymėti imunoglobulinai dedami tik į serumo praskiedimus santykiu 1:200 ir 1:3200, o tada iš pacientų, kurių titrai yra dideli, kraujo serumo paruošiami serumo skiedimai, kad būtų gautos optinio tankio (OD) indekso reikšmės. yra tiesiogiai proporcingi imunoglobulinų koncentracijai, o antikūnų titrui imamas mažiausias serumo praskiedimas, po kurio OD išlieka tame pačiame lygyje. Techninis rezultatas – padidinti ELISA rezultato vertinimo metodo tikslumą. 7 tab., 2 ill.

Šiuo metu antikūnų titrų nustatymas ELISA metodu yra vienas iš daugelio virusinių infekcijų atrankos testų.

Literatūroje pateikiama daug duomenų apie humoralinio imuniteto įvertinimą naudojant ELISA ir specifinius antikūnų titrų verčių skaičius: nuo 1: 20 000 iki 1: 102 400 („Priemonių prieš Krymo hemoraginę karštligę organizavimas ir įgyvendinimas natūralių židinių teritorijoje Rusijos“, Gairės, Maskva, 2001; red. pažyma „Virusinio hepatito B sunkumo diagnostikos metodas“ 4662993/14 89-03-16). Tačiau mokslininkai, sprendžiantys šią problemą, susiduria su daugybe sunkumų: neįmanoma tiksliai nustatyti titro, neatitikimas tarp jo vertės ir klinikinių ligos simptomų, tikslingumas skirti antivirusinį gydymą remiantis specifinių antikūnų titro verte. . Kiekybinio antikūnų titro rodiklio reikšmė turi didelę reikšmę klinikiniam virusinės infekcijos aktyvumo įvertinimui, paciento valdymo taktikos nustatymui, taip pat gydymo skyrimui ir jo efektyvumo stebėjimui.

Šias problemas ypač aiškiai parodo citomegaloviruso (CMV) ir herpes simplex viruso (HSV) sukeltų infekcijų pavyzdys. Citomegaloviruso ir herpetinių infekcijų diagnozė išlieka aktuali ir šiuo metu, ką patvirtina didelis skaičius jų aptikimo metodai ir bandymų sistemos.

Kadangi CMV ir HSV yra patogenai, patogeniniai žmogaus organizme, po pirminės infekcijos imunokompetentingiems asmenims gaminasi antikūnai, kurie visą gyvenimą išlieka žemais titrais (nuo 1:50 iki 1:800) ir neturi diagnostinės vertės.

Jei pacientui aptinkami antikūnai, kurių titras didesnis nei 1:800, būtina nustatyti padidėjusios indikatoriaus reikšmės priežastį, ypač nesant klinikinių simptomų. Paprastai tokiais atvejais po tam tikro laiko (2-3 savaičių) skiriama pakartotinė analizė, po kurios, remiantis gautais rezultatais, atsižvelgiant į analizės duomenis ir klinikinius simptomus, nustatoma galutinė diagnozė. pagamintas. Visiškai akivaizdu, kad taktika skirti gydymą specifiniais vaistais, kurie yra brangūs ir turi nemažai rimtų šalutiniai poveikiai ant kūno (vadovas laboratorinė diagnostika citomegalovirusinė infekcija gydytojams. M., 1996).

Šiuo metu pagrindinis antikūnų nustatymo testas yra ELISA metodas. Tačiau dauguma įvairių įmonių gaminamų ELISA tyrimų sistemų neleidžia kiekybiškai įvertinti žmogaus kraujo serume esančių specifinių antikūnų, atsekti jų augimo ar mažėjimo dinamikos gydymo eigoje, nes skirtas tik imuninei būklei nustatyti: fermentinis imunologinis tyrimas antikūnams prieš 1 ir 2 tipų herpes simplex virusą aptikti „Herpes-screen“, UAB „Bioservice“, Maskva; ELISA testų sistema, skirta aptikti antikūnus prieš citomegalovirusą „CMV-screen“, UAB „Bioservice“, Maskva ir kt.

Artimiausi analogai yra šie: „Fermentinės imuninės analizės tyrimo sistemos naudojimo instrukcija G klasės Ig nustatymui citomegaloviruso CMV-IgG“ (CJSC „ImDi“, Koltsovas, Novosibirsko sritis), „Tyrimo sistemos Vekto-BPG- instrukcija. IgG juostelė“ ( CJSC „Vector-Best“, Koltsovas, Novosibirsko sritis), „Tyrimo sistemos Cytomega Strip G instrukcija“ (CJSC „NEARMEDIC PLUS“, Maskva), „Fermentinio imunologinio tyrimo sistemos naudojimo instrukcija raudonukės viruso antikūnų aptikimas Rubella-screen“ (CJSC „Bioservice“, Maskva), kurie, nustatant antikūnų titrą, siūlo dvigubai praskiesti serumą.

Yra žinoma, kad antikūnų titras yra didžiausias serumo, kuriame yra specifinių antikūnų, praskiedimas. Nustatant imuninę būklę, atliekamas vienas serumo praskiedimas pagal instrukcijas, pridėtas prie tyrimo sistemos (1:50, 1:100), o vėliau, jei reikia, rekomenduojama jį toliau titruoti, skiediant du kartus iš eilės. Mes nustatėme, kad jei kraujo serume yra antikūnų, kurių titras yra iki 1:600-1:800, yra tiesiogiai proporcingas ryšys tarp optinio tankio vertės ir tiriamojo serumo antikūnų titro (1 pav. ). Virš šios abipusės titro vertės pažeidžiamas tiesioginis proporcingas ryšys, o dar du kartus titruojant (1:1600, 1:3200, 1:6400 ir kt.), gaunama klaida, kuri yra didesnė, tuo didesnis praskiedimas. Tai rodo tiesioginis serumo titravimas, kai kiekvienas serumo praskiedimas gaminamas iš viso serumo, ir buvo nustatyta, kad kuo mažesnis tipavimo žingsnis, tuo mažesnė paklaida.

Tokie duomenys atitinka pagrindinį Bouguer-Lambert-Beer kolorimetrijos dėsnį. Realiomis analitinio nustatymo sąlygomis spalvotos medžiagos, praskiestos arba veikiamos pašalinių medžiagų, sunaikinamos, susidaro bespalviai (ar kitaip spalvoti) reakcijos produktai. Dėl to pažeidžiamas tiesiogiai proporcingas koncentracijos ir optinio tankio santykis. Šie pažeidimai vadinami teigiamais arba neigiamais nukrypimais nuo Bouguer-Lambert-Beer įstatymo.

Šio išradimo tikslas yra pagerinti ELISA rezultato įvertinimo metodo tikslumą nustatant antikūnų titrą pacientų kraujo serume diagnozuojant virusines infekcijas.

Šis tikslas pasiekiamas tuo, kad 3-5 ml kraujo serumas, paimtas iš kubitalinės venos, gaunamas centrifuguojant 2500 aps./min 10-15 min., inaktyvuojamas 56 o C temperatūroje 30 min. iš eilės dvigubų praskiedimų, įpilkite imunoperoksidazės konjugatų ir atsižvelkite į reakcijos į AKI-C-01, kai bangos ilgis 492 nm, rezultatus, o tada, kad būtų galima tiksliau įvertinti ELISA, aptinkami antikūnai prieš virusinių infekcijų patogenus. , atitinkami peroksidaze pažymėti imunoglobulinai dedami tik į serumo praskiedimus 1:200 ir 1:3200, o toliau iš pacientų, kurių titrai yra dideli, kraujo serumo ruošiami serumo skiedimai taip, kad OD indikatoriaus reikšmės yra tiesioginėje imunoglobulinų koncentracijos proporcijoje: jei serumo OD vertė, gauta įprastu dvigubu titravimu praskiedus 1:200, yra didesnė 1,6-2,0 pagal prietaiso skalę, o praskiedus 1: 3200 – mažiau nei 1,0, tada 1 serumas: 200 skiedžiamas 2,5 karto ir tada titruojamas 1:500 intervalu, o jei serumo OD vertė praskiedus 1:3200 yra didesnė nei 1,0 instrumento skalėje, tada serumas 1:200 skiedžiamas 5 arba 10 kartų. ir vėlesni skiedimai ruošiami 1:1000 arba 1:2000 intervalu, o antikūnų titras imamas mažiausias serumo skiedimas, po kurio OD išlieka tame pačiame lygyje (mėginio OD – kontrolinio OD yra ne mažiau kaip 0,21).

Konkretaus įgyvendinimo pavyzdžiai.

1 pavyzdys. Pacientė P. buvo stebima nėščiųjų klinikoje dėl apsunkintos akušerinės anamnezės.

Tiriant paciento serumą ELISA, bandymų sistema, kurią gamina CJSC "ImDi", Koltsovas, Novosibirsko sritis. titruojant serumą nuosekliais dvigubais praskiedimais, antikūnų (IgG) prieš CMV titras buvo 1:25600.

Tiesiogiai skiedžiant serumą 1:1000 iš 1:200 ir toliau didinant 1:2000, antikūnų (IgG) titras serume buvo 1:5000 (žr. 1 lentelę).

Diagnozė patvirtinta CMV antigenų aptikimu fluorescencinių antikūnų metodu.

2 pavyzdys. Pacientas K. skundėsi bėrimais lytinių organų srityje.

Tiriant paciento kraujo serumą ELISA metodu (testų sistema, kurią gamina „Bioservice“, Maskva), paruoštą nuosekliai du kartus skiedžiant, ar nėra antikūnų (IgG) prieš HSV, antikūnų titrais: 1:6400 HSV tipui. I ir 1:3200 iki II tipo HSV (žr. 2 lentelę).

Tiesiogiai titruojant serumą 1:500 žingsniais (atskiedus 1:1000), antikūnų titras buvo 1:2000 I tipo HSV ir 1:1500 II tipo HSV (žr. 3 lentelę).

Diagnozė patvirtinta fluorescencinių antikūnų metodu nustačius HSV antigenus.

3 pavyzdys. Moteris antroje nėštumo pusėje kreipėsi į gydytoją dėl kontakto su vaiku, kuriam buvo diagnozuota raudonukės infekcija. Nėščioji nežinojo, ar vaikystėje sirgo raudonuke – serologinio tyrimo metu ELISA metu joje buvo rasta raudonukės viruso antikūnų (IgG), kurių titras 1:1600, serumą atskiedus dvigubai.

Po dviejų savaičių buvo paimtas antras kraujo mėginys ir suporuoti serumai buvo ištirti naudojant panašų titravimo metodą. Antikūnų titras išliko toks pat (žr. 4 lentelę).

Analizuojant suporuotus serumus, kurių praskiedimo pakopa yra 1:500 (nuo pradinio 1:200), antikūnų titras buvo 1:1000 (žr. 5 lentelę).

4 pavyzdys. Pacientas E. atvyko į akių skyrių su skundais dėl regėjimo organų ir jam buvo diagnozuota virusinė akių liga.

Atliekant tyrimą ELISA (testų sistema, kurią gamina CJSC „NEARMEDIC PLUS“, Maskva) paciento serumo, paruošto nuosekliai dvigubai praskiedus, G klasės imunoglobulinai CMV buvo aptikti titru 1:3200 (žr. 2), (žr. 6 lentelę).

To paties serumo tyrimas titruojant 1:200 žingsniais, pradedant praskiedimu 1:1000, parodė, kad paciento E serume antikūnų prieš CMV titras buvo 1:1200. (žr. 7 lentelę).

Diagnozė patvirtinta imunofluorescencine analize nustačius CMV antigenus.

Taigi siūlomas antikūnų titrų nustatymo ELISA metodu metodas leidžia tiksliau įvertinti antikūnų titrų reikšmes tiesiogiai proporcingai OP priklausomybei nuo jų koncentracijos kraujo serume, kontroliuoti jų pokyčius tiek ligos eigoje. ir gydymo metu. Šis metodas gali būti rekomenduojamas nustatant specifinių antikūnų titrus sergant kitomis infekcijomis.

Antikūnų titrų nustatymo metodu metodas fermentinis imunologinis tyrimas diagnozuojant virusines infekcijas, ruošiant serijinius dvigubus serumo skiedimus, pridedant imunoperoksidazės konjugatų ir atsižvelgiant į reakcijos į AKI-C-01, kai bangos ilgis 492 nm, rezultatus, būdingas tikslesnis ELISA rezultato įvertinimas, kai nustatomi antikūnai prieš virusinių infekcijų sukėlėjus, atitinkami peroksidaze pažymėti imunoglobulinai dedami tik į serumo praskiedimus 1:200 ir 1:3200, o po to ruošiami serumo skiedimai iš pacientų, sergančių infekcinių ligų sukėlėjų, kraujo serumo. dideli titrai taip, kad optinio tankio indekso (OD) reikšmės būtų tiesiogiai proporcingos imunoglobulinų koncentracijai: jei serumo OD reikšmė praskiedus 1:200 yra didesnė nei 1,6-2,0 prietaiso skalėje, o praskiedus 1:3200 – mažiau nei 1,0, tada serumas 1:200 skiedžiamas 2,5 karto ir po to titruojamas intervalu 1:500, o jei serumo OD reikšmė praskiedus 1:3200 yra didesnis nei 1,0 pagal prietaiso skalę, tada serumo praskiedimas santykiu 1:200 yat 5 arba 10 kartų ir paruoškite tolesnius skiedimus 1: 1000 arba 1: 2000 intervalais, o antikūnų titrui paimkite mažiausią serumo praskiedimą, po kurio OD išlieka tame pačiame lygyje (mėginio OD - OD kontrolė yra ne mažesnė kaip 0,21).

Panašūs patentai:

Išradimas yra susijęs su medicina ir gali būti naudojamas apsauginiams antikūnams prieš C-Diphtehriae bakterijas gauti ir hiperimuninių serumų gamyboje.

Išradimas yra susijęs su veterinarijos ir medicinos sritimi, būtent su laboratorine diagnostika

Išradimas yra susijęs su veterinarinės virusologijos sritimi, ypač su avių ir ožkų raupų diagnozavimo metodu.

Kai vyro ir moters kraujo Rh faktorius nesuderinamas, nėštumo metu tai tampa labai rimta problema. Tai žymiai padidina Rh konflikto su vaiku tikimybę.

Visi žino, kad jei būsimi tėvai nesutampa su Rh, nėštumas gali sukelti kraujo maišymąsi. Dėl to motinos organizmas pradeda gaminti antikūnus, kad apsaugotų. Jie atpažįsta svetimkūnius ir juos sunaikina. Jei tai yra bakterijos, virusai, augliai, tai nėra blogai, tačiau nėštumo metu antikūnai yra mirtini ir gresia vaisiaus mirtimi

Antikūnų tyrimas

Susituokusios poros, planuojančios nėštumą, privalo duoti kraujo. Remdamiesi jo duomenimis, specialistai nustato kraujo grupę, taip pat Rh faktorių, o prieš nėštumą įvertina galimą riziką ir parengia jos prevencijos ir pašalinimo schemą. Kraujas antikūnams nustatyti skiriamas kas mėnesį, pradedant nuo penktos nėštumo savaitės. Jei rodiklis aukštas, tai nėra sakinys. Šiandien gydytojai naudoja skirtingi metodai gydymas vaistais, kurio pagrindinis tikslas – reguliuoti reakcijas Imuninė sistema. Tarp jų yra plazmaferezė. Jei viskas bus padaryta laiku ir teisingai, kūdikis gali būti išgelbėtas, kol jis vystysis taip, kaip tikėtasi.

Jei nėštumo metu aptinkami antikūnai, turite stebėti jų kiekį kraujyje ir vaiko sveikatą. Be to, atliekama tokia analizė kaip antikūnų tipo nustatymas. Yra keletas jų tipų, kiekvienas turi savo gebėjimą sunaikinti vaisiaus kraujo ląsteles. Antikūnų tyrimo rezultatai leidžia nustatyti vystymosi tikimybę hemolizinė liga. Reguliarus ultragarso procedūra, atliekami nėštumo metu, o doplerometrija padeda įvertinti vaiko būklę ir gydymo priemonių poreikį.

Pirmojo nėštumo metu moters ir vaiko kraujas susimaišo po jo gimimo. Net jei atsiranda antikūnų, jie negali pakenkti kūdikio kūnui. Viso vėlesnio nėštumo metu Rh faktoriaus tikimybė kelis kartus padidėja. Kai organizme yra antikūnų, nėštumas gali baigtis labai liūdnai. Sunkiais atvejais vaisius miršta būdamas įsčiose.

Nėštumas ir Rh konfliktas

Rimtos problemos kyla tokiomis aplinkybėmis:

gimdymo metu į moters organizmą patenka nesuderinamas vaiko kraujas, todėl gaminasi antikūnai, kurie vėliau aktyvuojami teigiamas rh,
metu susimaišo vaiko ir motinos kraujas Negimdinis nėštumas, persileidimas, medicininis abortas pastojant, yra komplikacijų rizika,
antikūnų gali atsirasti atliekant prenatalinius tyrimus – chorioninę biopsiją ar amniocentezę, tokiais atvejais gali susimaišyti vaiko ir mamos kraujas.

Komplikacijos

Kai kuriais atvejais Rh konfliktas yra hemolizinių ligų priežastis. Esant tokiai situacijai, kūdikį gali išgelbėti tik kraujo perpylimas. Specialistai rekomenduoja šią procedūrą atlikti, kai vaisius yra mamos pilve. Po gimdymo vaikas siunčiamas į reanimacijos skyrių ir jam vėl perpilamas kraujas. Pasitaiko, kad Rh konfliktas įvyksta ne iš karto, bet laikui bėgant kūdikio organizme išsivysto gelta. Puiki suma bilirubinas tampa bloga įtaka galvos ir nugaros smegenų ląstelėse, pirmiausia subkortikiniuose branduoliuose, atsiranda neurologinių simptomų. Paprastai gydymas atliekamas naudojant specializuotą fluorescencinę lempą, kuri sumažina bilirubino kiekį kraujyje.

Raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimas sukelia staigų jų lygio sumažėjimą, o tai paveikia hemoglobino kiekį kraujyje. Dėl to augančio vaisiaus audiniai ir ląstelės aprūpinami nepakankamu deguonies kiekiu. Jei hemolizinė liga pasireiškia tokia forma, ji vadinama anemija. Raudonųjų kraujo kūnelių skaičiaus sumažėjimas padidina jų gamybą blužnyje ir kepenyse, todėl padidėja organų dydis. Jei vaikas dar negimęs, tokią organų būklę galima nustatyti ultragarsinio tyrimo metu.

Pavojingiausia hemolizinės ligos forma yra edema. Baltymų kiekio kraujyje sumažėjimas, ląstelėse atsirandantys sutrikimai sukelia audinių patinimą. Vaikas gimsta prastos būklės: neurologiniai simptomai, sunki mažakraujystė, širdies ir kvėpavimo sistemos sutrikimai, visa tai mažyliui palieka mažai šansų išgyventi arba visai visai.

Šiandien medicina yra labai išvystyta, todėl moterys, turinčios neigiamą Rh, turi galimybę ištverti ir pagimdyti visavertį vaiką. Tam naudojamas anti-D gama globulinas, kurio pagrindinė užduotis – neleisti vaiko eritrocitams patekti į motinos kraują, dėl to antikūnai nesigamina. Tokios injekcijos rekomenduojamos visoms moterims, nes dar neįmanoma tiksliai nustatyti vaisiaus Rh faktoriaus. Anti-D gama globulinas padės išvengti bet kokių komplikacijų neigiami veiksniai kurie sukelia kraujavimą iš placentos. Vaistas yra nekenksmingas vaisiui, tačiau svarbu, kad jis būtų nuodugniai ištirtas dėl hepatito ir AIDS.

Pirmosios konsultacijos su ginekologu metu būtina nustatyti nėščios moters kraujo grupę pagal Rh faktorių. Antikūnų kraujo tyrimas leidžia stebėti reakcijos buvimą ir intensyvumą moteriškas kūnas dėl nesuderinamo vaisiaus kraujo. Jei aptinkama antikūnų, reikia atidžiai stebėti vaiko būklę. Atliekamas ultragarsas, aminocentezė, kordocentezė. Antirezus imunoglobulino injekcijos atliekamos nustatytu laiku. Gydytojas taip pat nusprendžia, ar moteris galės išnešioti kūdikį, ar turės paskatinti priešlaikinį gimdymą.

Kai kuriais atvejais nėščioms moterims skiriama antikūnų prieš vyro spermą analizė. Paprastai tai atliekama, jei visi ankstesni moters nėštumai baigėsi persileidimais. Procedūra nėra maloni, tačiau padeda apsisaugoti nuo rimtų negimusio vaiko ligų.

Jei ruošiatės susilaukti vaikelio, turėtumėte apie tai pasakyti gydytojui. Pasiruošimo etape jums gali būti paskirtas kraujas dėl antikūnų prieš vadinamąsias TORCH infekcijas. Šiai grupei priklauso tokios kūdikiui itin pavojingos ligos kaip raudonukė, toksoplazmozė, pūslelinė, citomegalovirusas. Jie dažnai sukelia persileidimą ar priešlaikinį gimdymą ir neigiamai veikia vaisiaus organus, didina tikimybę, kad vaikas gims su deformacijomis ar įvairiomis raidos anomalijomis. Ypač neigiamai išvardytos ligos paveikia nervų sistemos funkcijas. Štai kodėl, sergant pirmine panašia liga, gydytojai primygtinai reikalauja nutraukti nėštumą. Jei moters kraujyje antikūnų prieš TORCH infekcijas aptinkama dar prieš nėštumą, tai leidžia besilaukianti mamaįsitikinkite, kad jos kūdikiui negresia pavojus.

Svarbu, kad nėščios moters kraujyje būtų raudonukės antikūnų, nes tai ypač klastinga infekcija. Jei imuniteto nėra arba jis susilpnėjęs, kaip rodo žemas antikūnų titras, tuomet verta pasiskiepyti prieš nėštumą.

Paprastai kraujo tyrimą dėl imuniteto TORCH infekcijoms moteris atlieka 8 nėštumo savaitę. IgM antikūnų buvimas parodys, kad liga jau pasireiškia organizme, o jei aptinkami IgG antikūnai, galima teigti, kad infekcija įvyko prieš nėštumą. Šiuo atveju nėra pagrindo baimintis dėl vaiko sveikatos.

Rezus konfliktas: kodėl neatitikimas yra mirtinas

Rh konfliktas gali išsivystyti, kai skiriasi vaisiaus ir motinos Rh faktorius. Be to, teigiamas Rh kūdikis padidina konflikto tikimybę, todėl pasekmės bus rimtesnės nei su neigiamu Rh. Esant situacijai, kai motinos kraujas turi Rh minusą, o tėvo kraujas yra teigiamas rodiklis, yra didelė tikimybė (75%), kad išsivystys Rh konfliktas su vaisiumi.

Prasidėjus nėštumui, moters kraujas pradeda intensyviai gamintis apsauginiai antikūnai, kurie ardo vaisiaus eritrocitus, patenka į jo kraują. Kaip rezultatas būsimas vaikas kenčia nuo deguonies trūkumo, dėl kurio išsivysto hemolizinė liga. Todėl moteris, atsidūrusi tokioje situacijoje, turėtų būti reguliariai tiriama dėl antikūnų. Padidėjęs antikūnų skaičius parodys Rh konflikto pradžią. Tam reikės skubių veiksmų. Paprastai šiuo atveju moteriai antireusinis imunoglobulinas skiriamas 7 nėštumo mėnesį. Jis vėl įvedamas trečią dieną po gimimo.

Įdomu tai tie patys rezus faktoriai tėvai, bet skirtingos grupės kraujas neatmeta konflikto dėl rezuso išsivystymo. Todėl tos moterys, kurios turi pirmąją grupę, nėštumo metu turėtų duoti daugiau kraujo grupės antikūnams.